《Journal of Ethnopharmacology》：Qilin Pills Protect Against Diminished Ovarian Reserve by Suppressing Pathological Overactivation of PINK1/Parkin-Mediated Mitophagy in Granulosa Cells
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民族药理学相关性：麒麟丸（QLP）是由唐代传统方剂五子衍宗丸衍生而来的经典中成药，具有补肾填精功效，用于改善生育力，临床广泛用于卵巢储备功能减退（DOR）的治疗，该病以排卵功能障碍及生育力下降为特征，但其具体作用机制尚未明确。
研究目的：探讨QLP对DOR的保
民族药理学相关性：麒麟丸（QLP）是由唐代传统方剂五子衍宗丸衍生而来的经典中成药，具有补肾填精功效，用于改善生育力，临床广泛用于卵巢储备功能减退（DOR）的治疗，该病以排卵功能障碍及生育力下降为特征，但其具体作用机制尚未明确。
研究目的：探讨QLP对DOR的保护效应并阐明其潜在分子机制。
材料与方法：研究人员采用环磷酰胺（CTX）构建DOR小鼠模型，分别给予低、中、高剂量QLP灌胃干预，并以戊酸雌二醇（E2V）作为阳性对照。通过卵巢指数、卵泡计数及血清抗缪勒管激素（AMH）水平评估卵巢功能；采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UHPLC-QTOF-MS）联合网络药理学技术筛选治疗靶点；以4-氢过氧环磷酰胺（4-HC）处理人卵巢颗粒细胞系KGN模拟体外化疗毒性损伤；通过Seahorse XF分析仪、JC-1染色、MitoSOX Red染色、二氢乙啶（DHE）荧光检测、线粒体DNA（mtDNA）定量及透射电子显微镜评估线粒体功能；采用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）及免疫荧光技术检测卵巢组织与KGN细胞中PINK1/Parkin通路相关线粒体自噬关键基因的表达；通过PINK1过表达实验验证该调控机制。
结果：体内实验显示，QLP可提升DOR小鼠的卵巢储备功能，表现为生长卵泡数量增多、AMH水平升高、萎缩卵泡及颗粒细胞凋亡减少，其中中剂量QLP的改善效果优于E2V。UHPLC-QTOF-MS鉴定的化合物经网络药理学分析共获得166个作用靶点，显著富集于线粒体生物能量代谢及线粒体自噬通路。QLP可减轻颗粒细胞的线粒体功能障碍、氧化应激及过度线粒体自噬。体外实验中，QLP含药血清可恢复线粒体呼吸功能与膜电位，降低活性氧（ROS）水平。机制层面，CTX/4-HC可上调PINK1/Parkin表达并诱导线粒体自噬过度激活；QLP呈现非单调剂量效应：中剂量可最优程度重平衡该过度激活以保护颗粒细胞，高剂量则因诱发轻度细胞应激导致线粒体自噬出现代偿性反弹。PINK1过表达可阻断QLP的保护作用，证实抑制PINK1/Parkin通路是其发挥治疗效应的关键。
结论：QLP通过重平衡PINK1/Parkin介导的线粒体自噬病理性过度激活，恢复线粒体稳态，从而预防DOR的发生，为QLP保护卵巢功能提供了实验依据。
该研究发表于《Journal of Ethnopharmacology》，针对当前卵巢储备功能减退（DOR）缺乏标准化治疗方案、分子机制尚未完全阐明的临床痛点展开。DOR是育龄期女性生育力下降的重要病理基础，若未及时干预可进展为早发性卵巢功能不全（POI），现有激素替代、辅助生殖等手段均无法阻断疾病进程。线粒体作为卵母细胞成熟与卵泡发育的核心供能细胞器，其质量控制机制——尤其是选择性清除受损线粒体的线粒体自噬（mitophagy），在颗粒细胞稳态维持中发挥关键作用，但既往研究对其在DOR中的作用存在“增强可改善衰老”“过度激活诱导凋亡”的矛盾结论，且PINK1（PTEN诱导假定激酶1）/Parkin（帕金蛋白，RBR型E3泛素连接酶）轴在该疾病中的具体调控模式仍不明确。麒麟丸（QLP）作为五子衍宗丸加减的经典中成药，已在多项临床随机对照试验中被证实可提升DOR患者AMH水平、改善月经周期并提高妊娠率，但其作用靶点与分子机制尚未得到系统阐释，因此本研究旨在从线粒体自噬角度揭示QLP防治DOR的科学内涵。
研究人员主要采用的关键技术方法包括：构建环磷酰胺诱导的DOR小鼠模型，设置多剂量QLP干预组与戊酸雌二醇阳性对照组，通过卵巢组织病理学与血清激素水平评估卵巢功能；采用UHPLC-QTOF-MS解析QLP化学成分，结合网络药理学筛选核心靶点与通路；以4-HC处理KGN细胞构建体外损伤模型，运用Seahorse XF能量代谢分析、多模态荧光染色、mtDNA定量及透射电镜表征线粒体功能；通过Western blotting与免疫荧光检测PINK1/Parkin通路蛋白表达，并利用基因过表达技术验证靶向调控关系。
研究结果如下：
民族药理学相关性：明确了QLP的处方渊源与临床定位，其组方包含菟丝子、枸杞子、覆盆子等15味中药，具有补肾填精、益气养血功效，已被纳入国家药品标准，为后续机制研究提供药学基础。
研究目的：清晰界定本研究核心目标为阐明QLP防治DOR的线粒体自噬调控机制。
材料与方法：详述了模型构建、药物干预、靶点筛选、细胞功能检测及机制验证的全流程技术体系。
结果：体内层面，中剂量QLP可显著增加DOR小鼠生长卵泡计数与血清AMH水平，减少萎缩卵泡与颗粒细胞凋亡，疗效优于阳性对照药；网络药理学分析显示QLP的作用靶点显著富集于线粒体生物能量代谢与线粒体自噬通路；体外层面，QLP含药血清可逆转4-HC诱导的线粒体呼吸功能损伤、膜电位下降及ROS过度累积；机制层面证实CTX/4-HC通过上调PINK1/Parkin表达诱导线粒体自噬过度激活，QLP呈非单调剂量效应调控该通路——中剂量精准重平衡过度激活，高剂量因诱发轻度应激导致代偿性反弹，PINK1过表达可完全阻断QLP的保护效应，确证该通路是QLP发挥作用的核心靶点。
结论：凝练核心发现，即QLP通过抑制PINK1/Parkin介导的线粒体自噬病理性过度激活，恢复颗粒细胞线粒体稳态，从而实现DOR防治效应。
讨论部分指出，当前全球范围内尚无FDA批准的DOR特异性治疗药物，临床需求未得到满足。本研究首次系统证实PINK1/Parkin轴介导的线粒体自噬过度激活是DOR发生的关键分子机制，突破了既往关于线粒体自噬在卵巢疾病中作用的争议，明确了“适度调控而非单纯增强或抑制”的干预逻辑。QLP作为已上市中成药，其多成分、多靶点调控线粒体稳态的优势为DOR治疗提供了新的候选策略，也为传统补肾填精治法提供了现代生物学证据。
研究结论翻译：综上，本研究通过整合网络药理学与体内外实验，证实PINK1/Parkin介导的线粒体自噬病理性过度激活是DOR卵泡发育异常的关键分子机制；QLP通过重平衡过度线粒体自噬、恢复线粒体稳态，有效改善卵巢储备功能，其机制核心是选择性抑制PINK1/Parkin轴的病理性过度激活。
