冷冻的黑色素瘤组织可产生具有保留的诊断和免疫原性的细胞外囊泡

《BMC Medicine》：Frozen melanoma tissues yield extracellular vesicles with preserved diagnostic and immunogenic properties

　　

摘要

背景

从肿瘤组织中分离出的细胞外囊泡（EVs）携带与疾病相关的蛋白质和表面抗原，这使它们成为癌症诊断和免疫疗法的有希望的候选者。为了使基于EV的方法能够应用于临床，必须能够从临床可获得的材料中获取功能性EVs，包括储存在生物库中的冷冻肿瘤组织。冷冻是否会影响EV的完整性和功能仍不清楚。本研究评估了从冷冻肿瘤组织中提取的EVs是否保留了用于诊断和治疗所需的关键分子和生物学特性。

方法

EVs是从手术切除后立即处理的人体转移性黑色素瘤组织（新鲜组织）或在-80°C下储存（冷冻组织）中分离出来的，使用的是与标准生物库程序一致的方案。EV的分离通过超速离心后使用碘己醇密度缓冲层完成。所得EVs通过透射电子显微镜、纳米粒子追踪分析和质谱法进行表征，以评估其形态、纯度和分子组成。通过检测先前已鉴定的与癌症相关的膜蛋白来评估其诊断潜力。此外，通过在携带黑色素瘤的小鼠体内同时给予来自新鲜或冷冻黑色素瘤组织的EVs和合成细菌囊泡，来评估其治疗潜力，并评估它们对肿瘤生长的影响。

结果

来自新鲜和冷冻组织的EVs在形态、大小分布、产量和纯度方面表现出相似性。此外，包括MT-CO2、COX6c、SLC24A22、HLA-DR和Erlin2等与癌症相关的标记物在内的蛋白质组成在来自新鲜和冷冻组织的EVs之间高度一致，冷冻来源的EVs中没有显著的细胞内或线粒体污染物富集。从功能上看，来自冷冻组织的EVs与合成细菌囊泡结合使用在体内显著抑制了肿瘤进展，显示出与来自新鲜组织的EVs相当的抗肿瘤效果。

结论

我们的结果验证了冷冻组织是功能性EVs的可靠来源，与新鲜组织相当。这支持了现有生物库可用于回顾性基于EV的生物标志物发现和功能研究的潜力。

图形摘要

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