与中国软壳龟（Pelodiscus sinensis）腹水综合征相关的高致病性正黄病毒的分离与鉴定

《Archives of Virology》：Isolation and characterization of a highly pathogenic Orthoflavivirus associated with ascites syndrome in Chinese soft-shelled turtles (Pelodiscus sinensis)

　　

摘要

自2016年以来，中国软壳龟（Pelodiscus sinensis）养殖场中出现了以严重腹部肿胀和腹水为主要特征的大规模死亡事件，导致了巨大的经济损失。然而，该疾病的病因一直难以确定，因为在患病龟体内未检测到细菌或寄生虫。研究人员使用组织匀浆液感染了Vero、GCO、TSK、TSL和C6/36细胞，这些细胞均出现了细胞病变效应（CPE）。通过透射电子显微镜（TEM）观察到患病龟的肾脏组织中存在直径约为30纳米（nm）的球形病毒颗粒。通过序列独立单引物扩增（SISPA）和高通量测序技术获得了完整的病毒基因组，并利用cDNA末端快速扩增（RACE）技术确定了基因组的末端序列。该病毒基因组为正链单链RNA，长度为10,956个核苷酸（nt），具有典型的正黄病毒科（Orthoflavivirus）特征，并编码一个开放阅读框（ORF）。系统发育分析表明，该病毒与Trionyx sinensis黄病毒分离株YH2018最为接近，属于Orthoflavivirus属。因此，该病毒被命名为P. sinensis黄病毒分离株HZ2016（PSFV-HZ2016）。在人工感染实验中，注射组织匀浆液后，健康龟在16天内全部死亡。感染龟表现出与原发病例相似的症状。逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）显示该病毒具有广泛的组织嗜性，其中心脏中的病毒载量最高。组织病理学分析证实了多器官损伤，这与严重的系统性感染一致。这些发现表明PSFV-HZ2016是一种新型且高毒力的Orthoflavivirus，是导致P. sinensis腹水相关死亡的原因，为水产养殖中的诊断、监测和疾病管理提供了重要线索。