重组甘精胰岛素代谢物M1的集成顺序色谱纯化方法

《International Journal of Peptide Research and Therapeutics》：Integrated Sequential Chromatographic Purification of Recombinant Insulin Glargine Metabolite M1

　　

摘要

目的

结构明确且符合药品标准的胰岛素类似物对于确保其药理性能的一致性至关重要。本研究旨在开发一种稳健且可扩展的下游处理策略，以实现重组胰岛素甘精代谢物M1（一种长效胰岛素类似物）的高效生产和纯化，同时保证其高纯度和分子完整性。

方法

表达胰岛素甘精代谢物M1的重组大肠杆菌在发酵结束后通过离心法进行收获。细胞裂解和溶解后，从包涵体中回收目标蛋白。随后通过硫醇解处理使蛋白质线性化，再利用异丙醇（IPA）沉淀进行浓缩。使用溴化氰（CNBr）切割去除His标签。所得的前胰岛素中间体经过重折叠恢复其天然构象。随后利用胰蛋白酶和羧肽酶B将其酶促转化为成熟的代谢物M1。纯化过程包括阴离子交换色谱（A-IEX）、疏水相互作用色谱（HIC）以及反相色谱（RPC）的最终精制步骤。

结果

SDS–PAGE分析证实了蛋白质的成功成熟，并去除了高分子量杂质。连续的色谱步骤有效去除了工艺相关的污染物，包括错误折叠的蛋白质、聚集体和残留酶。反相色谱（RPC）得到一个单一、清晰且对称的峰，表明产品的化学纯度高达99.5%。电喷雾离子化质谱法验证了产品的分子身份和完整性，其分子量为5750 Da。

结论

所开发的集成下游处理工艺能够生产出高纯度且结构均一的胰岛素甘精代谢物M1，显示出其在制药应用及进一步生化表征方面的潜在适用性。

图形摘要

此图像的替代文本可能是由人工智能生成的。