埃及家鸭雏鸭近期分离株鸭星状病毒Pathomolecular特征分析

《Scientific Reports》：Pathomolecular characterization of recently isolated duck Astrovirus from domestic ducklings in Egypt

　　

研究人员针对埃及多个省份家鸭养殖场的急性死亡病例开展病原学调查，发现受感染雏鸭均接种过减毒活鸭肝炎疫苗，但仍出现突发性神经症状及严重肝炎病变。实验室通过SPF鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）成功分离到一株鸭星状病毒（DAstV），命名为DAstV?VSVRI?CLEVB?2022，电镜观察显示其具有典型的六角星形结构。分子检测靶向ORF1b保守区扩增出434?bp片段，序列分析表明该毒株与中国2014年分离株HBGT（KX290465.1）同源性达100%，属于禽星状病毒2型（Avastrovirus?2）。致病性试验显示，1日龄易感雏鸭经口鼻接种后出现典型肝炎症状，感染后31、38和50小时分别发生死亡，肝脏表面呈刷状出血。结果表明，DAstV可能是埃及急性鸭肝炎的重要病原之一，建议基于本地分离株制备自家疫苗并结合严格生物安全措施防控该病。

本研究由埃及科研团队完成，发表于《Scientific Reports》，聚焦于近年埃及家鸭养殖场中暴发的急性鸭肝炎疫情。鸭病毒性肝炎（DVH）是一种急性、高度接触性传染病，常导致雏鸭高发病率和高死亡率，造成显著经济损失。传统认为DVH主要由小RNA病毒科（Picornaviridae）的鸭肝炎病毒（DHAV）引起，但近年发现星状病毒科（Astroviridae）成员——尤其是鸭星状病毒（DAstV）在致病机制上与DHAV相似，且可在免疫鸭群中突破母源抗体保护引发疫情。埃及此前仅有关于DHAV的分子流行病学报道，尚无DAstV的确证病例与遗传特征研究。因此，明确DAstV在埃及的存在及其分子特征、致病性，对完善疫病防控策略具有重要意义。

研究人员在2022至2023年间，从Al?Qalyubia、Al?Sharqia和Assuit三省共8个发病鸭场采集自然感染死亡雏鸭组织样本，所有病例均排除H5N1禽流感及DHAV?1、DHAV?3感染。通过SPF鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）分离病毒，结合透射电镜（TEM）、逆转录PCR（RT?PCR）、测序和系统发育分析进行病原鉴定。致病性试验采用1日龄非免疫雏鸭进行接种观察，并通过组织病理学评估多脏器损伤。

临床与病理学检查

现场病例表现为精神沉郁、震颤、斜颈、角弓反张及突发死亡，剖检可见肝脏出血、脾肿大、脑膜出血及胰腺坏死。实验感染组雏鸭在接种后25小时出现运动失调，31至50小时内全部死亡，伴随绿色水样腹泻，肝脏呈刷状出血带。

分子检测

所有样本均为H5N1及DHAV阴性，DAstV?RT?PCR扩增阳性，获得约434?bp特异性片段，且在第三、四代鸡胚CAM及实验感染鸭肝中持续检出。

序列与系统发育分析

ORF1b序列提交GenBank（PP105462），与HBGT?China?2014（KX290465.1）同源性为100%，与PD05.18?AU2018（MT894395）同源性为99.4%，聚类于同一进化分支。

病毒分离与滴度测定

病毒在CAM上传代适应，第四代出现明显坏死与增厚，胚胎肝脏及尿囊液呈绿色，病毒滴度分别为10⁸/μl（肝）与10¹¹/μl（CAM）。

致病性试验

所有接种鸭均在50小时内死亡，剖检见肝出血、脑膜炎、脾肿大、肾炎及肠炎，未吸收卵黄囊亦可见病变。

透射电镜观察

纯化病毒颗粒直径约42?nm，呈典型六角星形外观。

组织病理学检查

肝组织出现肝细胞坏死、脂肪变性、胆管上皮增生及炎性浸润；胰腺腺泡细胞酶原颗粒缺失伴局灶性坏死；脾脏白髓淋巴细胞减少；肾脏肾小管坏死伴间质充血；心肌局灶性坏死及炎性细胞浸润；肠道黏膜坏死与隐窝扩张；脑组织脑膜炎、神经元变性及血管周围炎性细胞套形成。对照组未见异常。

讨论部分指出，DAstV与DHAV在临床与病理上极为相似，可突破常规疫苗免疫屏障，且具备垂直传播潜力。本株DAstV与亚洲流行株高度同源，提示跨国界传播风险。鉴于埃及此前无DAstV遗传数据，本研究首次证实其在当地存在并具强致病性。结论强调，应基于本地分离株开发针对性疫苗，并配合生物安全措施控制疫情。