血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤亚型的单细胞转录组免疫异质性图谱绘制

《Biomarker Research》：Single-cell transcriptomic mapping of immune heterogeneity across angioimmunoblastic T-cell lymphoma subtypes

　　

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤（angioimmunoblastic T-cell lymphoma, AITL）的复发和治疗抵抗仍是临床管理中的关键障碍，限制了当前治疗策略的成功。因此，全面表征AITL中的肿瘤微环境（tumor microenvironment, TME）对于提高治疗效果至关重要。本研究分析了68例AITL患者的样本，根据免疫球蛋白（immunoglobulin, IG）基因重排和流式细胞术结果将其分层为三种分子亚型。利用单细胞RNA测序（single-cell RNA sequencing, scRNA-seq），研究人员对亚型A、B和C的TME进行了分析，采样部位包括骨髓、淋巴结和外周血。研究结果显示，TME中的细胞组成和转录程序存在亚型特异性变异。与其他亚型不同，亚型C在诊断和复发时均与显著的免疫抑制环境相关。此外，亚型C表现出对EB病毒（Epstein–Barr virus, EBV）感染的增强应答，这与复发时CD70的上调一致。通过细胞通讯网络分析，CD70、程序性细胞死亡1（programmed cell death 1, PDCD1）和诱导性T细胞共刺激因子（inducible T cell costimator, ICOS）被确定为AITL中有前景的免疫治疗靶点。最后，研究人员描绘了各亚型特有的细胞比例和基因表达特征，为AITL患者的个体化治疗干预奠定了基础。

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤（angioimmunoblastic T-cell lymphoma, AITL）是一种具有侵袭性和异质性的外周T细胞淋巴瘤（peripheral T-cell lymphoma, PTCL），预后较差，目前尚无标准治疗方案。该疾病以少量肿瘤性T滤泡辅助细胞（T follicular helper cells, Tfh）存在于复杂的炎症性肿瘤微环境中为特征，此微环境包括EB病毒阳性（EBV-positive, EBV⁺）B细胞、浆细胞和滤泡树突状细胞（follicular dendritic cells, FDC）。约25-30%的病例显示克隆性IG重排。尽管既往研究报道了B细胞扩增现象，但缺乏亚型特异性和纵向层面的解析。

为深入探究AITL的免疫异质性，研究人员开展了一项纵向单细胞转录组研究。该研究前瞻性纳入68例AITL患者，根据受累淋巴结的免疫球蛋白基因重排及诊断时骨髓流式细胞术结果，将其分为三种分子亚型：亚型A（47例，仅单克隆T细胞）、亚型B（19例，同时存在克隆性IG重排）和亚型C（2例，同时存在单克隆B细胞和浆细胞）。亚型B相对于亚型A显示出改善生存的非显著趋势，而两例亚型C患者均为晚期EBV⁺ AITL，具有病理证实的克隆性IG重排和异常的T/B/浆细胞表型。

研究人员对16例AITL患者的骨髓、淋巴结和外周血样本进行了纵向单细胞RNA测序，并结合T细胞受体/B细胞受体（T-cell receptor/B-cell receptor, TCR/BCR）V(D)J测序数据，涵盖诊断、缓解和复发三个时间点。整合分析揭示了16个细胞簇，显示出明显的亚型、阶段和病灶特异性重塑。在区室分析中，研究人员定义了三种恶性亚型、11个T细胞亚群和10个单核细胞亚群。亚型A/B中亚型C具有更高丰度的效应CD8⁺ T细胞和γδ T细胞；而亚型C则以丰富的恶性B/浆细胞和耗竭的Tfh细胞为特征。在T细胞亚群中，RAS鸟苷释放蛋白1（RAS guanyl releasing protein 1, RASGRP1）、Janus激酶3（Janus kinase 3, JAK3）和PR/SET结构域1（PR/SET domain 1, PRDM1）在亚型C诊断时富集，这与EBV感染相关的T细胞应答转录程序一致。在患者C01中，恶性B/浆细胞在骨髓和血液中占主导，而恶性Tfh细胞集中于淋巴结样本；效应CD8⁺ T细胞和调节性T细胞（regulatory T cells, Treg）在淋巴结样本中富集，提示早期Tfh/免疫优势。免疫组化和流式细胞术证实了各病灶间异常T/B/浆细胞亚群的存在。

考虑到约70%AITL病例存在骨髓受累，研究人员进一步比较了骨髓样本中的免疫组成。在患者C01中，恶性Tfh细胞在复发时显著扩增，而恶性B细胞和浆细胞在化疗后下降且未再复发。与之相反，尽管未接受B细胞靶向治疗，A01和A02患者却显示出B/浆细胞区室的显著变化。恶性程序1（富集B细胞增殖/活化基因CD22、CD86、FGR）在C01诊断时最高，缓解期下降。与免疫再激活一致的恶性T细胞程序（TCR信号相关基因LAT、LCK）在A01/A02中缓解期降低、复发时反弹，但在C01复发时仍受抑制。单核细胞计数在复发时出现分歧：C01下降，而A01/A02增加，并伴有炎症和EBV相关特征。

T细胞重塑同样存在差异：在C01中，缓解期效应CD8⁺ T细胞增加而复发时下降，Treg细胞在复发时上升，提示免疫抑制；A01/A02则保持T细胞比例稳定。不同转录程序被映射至特定亚群：细胞毒性程序（颗粒酶B [granzyme B, GZMB]、颗粒溶素 [granulysin, GNLY]）定位于γδ和效应记忆CD8⁺ T细胞；CD4富集的TCR信号/分化程序；以及耗竭CD8⁺ T细胞中的病毒应答程序，提示肿瘤抑制活性。

纵向分析显示，C01中恶性Tfh细胞、效应γδ T细胞和Treg细胞之间的相互作用增加，提示耐药相关信号。配体-受体分析识别出保守性与阶段限制性介导因子：FMS相关受体酪氨酸激酶3（fms-related receptor tyrosine kinase 3, FLT3）相互作用发生于诊断和缓解期，但不见于复发期。CD70（与EBV驱动的T细胞应答相关，复发前缺失）在复发时富集于Treg细胞和祖代耗竭CD8⁺ T细胞，并与增强的Tfh-T细胞串扰相关；程序性死亡配体1（programmed cell death-ligand 1, PD-L1）/CD274同样支持免疫抑制性微环境。患者A01显示可变的Tfh-单核细胞串扰及介导因子（FLT3、ICOS/CD28）变化。克隆性分析印证了这些变化：C01在各阶段维持高扩增BCR/TCR克隆，而A01/A02在缓解期出现克隆收缩。

该探索性纵向单细胞研究揭示了AITL中亚型特异性的分子和免疫异质性。研究结论指出，亚型C在诊断和复发时均与显著的免疫抑制环境相关，且表现出对EBV感染的增强应答，与复发时CD70上调一致。通过细胞通讯网络分析，CD70、PDCD1和ICOS被确定为AITL中有前景的免疫治疗靶点。研究人员最终描绘了各亚型特有的细胞比例和基因表达特征，为AITL的个体化治疗干预提供了基础。未来研究需要在更大规模的前瞻性队列中验证这些发现，这些队列应具有明确界定的组织来源和充分的统计效能。