利用propidium monoazide-qPCR方法对Vibrio scophthalmi的抗生素抗性进行基于生存能力的评估

《Marine Environmental Research》：Viability-Based Assessment of Antibiotic Resistance in Vibrio scophthalmi Using propidium monoazide-qPCR

Hwa-Seong Son | Kun-Woo Yun | Min-Jun Seong | Sang-Min Lee | Mu-Chan Kim

摘要

Vibrio scophthalmi是一种海洋鱼类病原体，常见于Paralichthys olivaceus和Scophthalmus maximus这两种主要在东亚养殖的比目鱼中。传统的抗生素敏感性测试（AST）和最低抑菌浓度（MIC）方法仅能检测可培养的细胞，因此可能会低估细菌在抗生素压力下的存活情况；而定量PCR（qPCR）可能会因扩增非存活细胞的DNA而高估细菌数量。为克服这些方法学局限性，本研究采用了丙胺嗪单氮化合物（PMA）-qPCR技术，作为一种基于细胞存活状态的分子检测方法，用于量化从野生海洋鱼类中分离出的V. scophthalmi菌株中膜结构完整的细菌。

研究人员评估了六种抗生素，并通过配对t检验和Bland–Altman分析法比较了AST、MIC和PMA-qPCR的结果。PMA-qPCR方法有效减少了膜受损细胞的扩增现象，其对细菌数量的估计更为保守。在所测试的抗生素中，四环素处理虽然通过MIC测试抑制了细菌生长，但PMA-qPCR信号仅有轻微下降，表明在抑菌条件下膜结构完整的细菌仍能存活。这些发现与先前的研究结果一致，这些研究指出V. scophthalmi具有耐四环素的能力。

本研究首次将PMA-qPCR技术应用于基于细胞存活状态的V. scophthalmi抗生素敏感性评估。结果表明，该方法在补充基于培养方法的检测方面具有潜在优势，并为未来从“同一健康”（One Health）视角出发研究海洋和水产养殖环境中的抗生素耐药细菌提供了支持。