M6A修饰的长链非编码RNA（lncRNA）HULC通过与TAF15的相互作用稳定GLUT1 mRNA，从而促进骨肉瘤的进展

《Cellular Oncology》：M6A-modified lncRNA HULC promotes osteosarcoma progression by stabilizing GLUT1 mRNA through interaction with TAF15

摘要

背景

长链非编码RNA（lncRNA）HULC的过表达被认为是骨肉瘤（OS）进展的重要因素。然而，其在OS中的确切作用和机制仍不清楚，需要进一步研究。

方法

使用定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）测量了HULC、甲基转移酶样3（METTL3）、TATA盒结合蛋白相关因子15（TAF15）和葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）的表达水平。通过RNA原位杂交和亚细胞定位分析来确定HULC的空间分布。利用甲基化RNA免疫沉淀（MeRIP）实验评估了HULC的甲基化情况。进行了包括CCK8和Transwell实验在内的功能测定，以评估细胞活力、迁移能力和侵袭性。通过免疫荧光染色检测E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白来评估上皮-间质转化（EMT）。通过细胞外酸化率、氧气消耗率、葡萄糖摄取量、乳酸生成量和ATP水平来评估糖酵解情况。通过Western blotting（WB）分析了与糖酵解相关的标志物TAF15和GLUT1的蛋白水平。使用异种移植和肺转移模型来研究HULC和METTL3在OS肿瘤发生和转移中的作用，并通过RNA免疫沉淀（RIP）和RNA pull-down实验研究了TAF15与HULC或GLUT1之间的相互作用，同时荧光原位杂交证实了HULC和TAF15的共定位。

结果

研究发现，HULC表达升高与OS患者的不良预后相关。此外，METTL3介导的m⁶A修饰稳定了HULC的表达，从而促进了OS细胞的活力、迁移能力、EMT和糖酵解，这些效应在METTL3下调后可以得到逆转。在体内实验中，METTL3敲低主要通过降低HULC表达来抑制肿瘤生长和肺转移。从机制上看，HULC通过与TAF15相互作用增强了GLUT1 mRNA的稳定性。沉默TAF15或GLUT1可以减轻HULC过表达的效应，抑制OS细胞的活力、转移能力、EMT和糖酵解。

结论

HULC的m⁶A修饰通过与TAF15相互作用稳定GLUT1 mRNA，从而促进OS的进展，这突出了OS发病机制中的一个潜在调控轴，并为针对METTL3、HULC或TAF15的治疗策略提供了见解。

背景

长链非编码RNA（lncRNA）HULC的过表达被认为是骨肉瘤（OS）进展的重要因素。然而，其在OS中的确切作用和机制仍不清楚，需要进一步研究。

方法

使用定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）测量了HULC、甲基转移酶样3（METTL3）、TATA盒结合蛋白相关因子15（TAF15）和葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）的表达水平。通过RNA原位杂交和亚细胞定位分析来确定HULC的空间分布。利用甲基化RNA免疫沉淀（MeRIP）实验评估了HULC的甲基化情况。进行了包括CCK8和Transwell实验在内的功能测定，以评估细胞活力、迁移能力和侵袭性。通过免疫荧光染色检测E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白来评估上皮-间质转化（EMT）。通过细胞外酸化率、氧气消耗率、葡萄糖摄取量、乳酸生成量和ATP水平来评估糖酵解情况。通过Western blotting（WB）分析了与糖酵解相关的标志物TAF15和GLUT1的蛋白水平。使用异种移植和肺转移模型来研究HULC和METTL3在OS肿瘤发生和转移中的作用，并通过RNA免疫沉淀（RIP）和RNA pull-down实验研究了TAF15与HULC或GLUT1之间的相互作用，同时荧光原位杂交证实了HULC和TAF15的共定位。

结果

研究发现，HULC表达升高与OS患者的不良预后相关。此外，METTL3介导的m⁶A修饰稳定了HULC的表达，从而促进了OS细胞的活力、迁移能力、EMT和糖酵解，这些效应在METTL3下调后可以得到逆转。在体内实验中，METTL3敲低主要通过降低HULC表达来抑制肿瘤生长和肺转移。从机制上看，HULC通过与TAF15相互作用增强了GLUT1 mRNA的稳定性。沉默TAF15或GLUT1可以减轻HULC过表达的效应，抑制OS细胞的活力、转移能力、EMT和糖酵解。

结论

HULC的m⁶A修饰通过与TAF15相互作用稳定GLUT1 mRNA，从而促进OS的进展，这突出了OS发病机制中的一个潜在调控轴，并为针对METTL3、HULC或TAF15的治疗策略提供了见解。