《Immunobiology》：Identification and structural characterization of soluble dectin-1 with β-glucan-binding activity in THP-1 cell culture supernatant
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Dectin-1是抗真菌免疫中的主要受体，以膜结合型Dectin-1（mDectin-1）发挥功能，但其可溶性形式sDectin-1的生物学功能尚不明确。研究人员构建了稳定表达N端FLAG标签与C端HiBiT标签的人Dectin-1 A亚型的THP-1细胞系，
Dectin-1是抗真菌免疫中的主要受体，以膜结合型Dectin-1（mDectin-1）发挥功能，但其可溶性形式sDectin-1的生物学功能尚不明确。研究人员构建了稳定表达N端FLAG标签与C端HiBiT标签的人Dectin-1 A亚型的THP-1细胞系，以解析胞外环境中sDectin-1的存在机制、分子形式及功能特征。结果显示，sDectin-1可组成性地在培养上清中被检测到，其水平在Dectin-1–Syk通路激活（curdlan刺激）及非Dectin-1依赖性炎症信号（TNF-α刺激）下均显著升高。功能分析表明，sDectin-1保留了对不溶性及可溶性β-葡聚糖的配体结合能力。此外，Western blotting结果提示，sDectin-1的主要分子形式为N端截短片段，符合胞外域截断特征。本研究证实sDectin-1是一种具有配体结合能力的功能性可溶性受体，其水平受炎症信号调控，可能作为诱饵受体或反式信号因子发挥作用，为抗真菌免疫提供了新的视角。
该研究发表于《Immunobiology》，聚焦于可溶性Dectin-1（sDectin-1）这一长期未被明确功能表征的分子。侵袭性真菌病（IFI）在造血干细胞移植及化疗人群中致死率高，现有抗真菌药物面临耐药与宿主毒性瓶颈，深入解析宿主抗真菌免疫应答机制是开发新型治疗策略的核心基础。Dectin-1属于C型凝集素受体（CLR）家族，是识别真菌细胞壁核心成分β-葡聚糖的模式识别受体（PRR），其膜结合形式（mDectin-1）可通过Syk及Raf-1通路触发活性氧（ROS）生成与细胞因子分泌，介导抗真菌免疫。与其他膜受体的可溶性形式类似，sDectin-1已在临床样本中检出，但其是具备功能的活性分子还是无功能降解产物，此前尚无定论。针对这一空白，研究人员旨在通过分子与功能层面明确sDectin-1的结构特征与β-葡聚糖结合能力，填补该领域的认知缺口。
研究中采用的关键技术方法包括：构建稳定表达N端FLAG标签与C端HiBiT标签人Dectin-1 A亚型的THP-1细胞系，通过慢病毒转导与杀稻瘟菌素筛选获得；利用基于HiBiT标签的生物发光法实现胞外sDectin-1的高灵敏度定量；采用不溶性β-葡聚糖拉下实验与可溶性β-葡聚糖直接结合实验验证配体结合特异性；通过免疫印迹分析sDectin-1的分子大小与结构特征；结合Dectin-1激动剂curdlan与炎症因子TNF-α刺激，及Syk通路抑制剂处理，解析sDectin-1释放的调控机制。
研究结果如下：
3.1 双标签Dectin-1表达THP-1细胞的构建与验证
通过流式细胞术证实dTHP-1_HiBiT细胞表面高表达Dectin-1，且C端HiBiT标签可被胞外检测体系识别，验证了细胞模型的功能可用性。
3.2 THP-1细胞培养上清中sDectin-1的组成性蓄积
未刺激条件下，dTHP-1_HiBiT上清中sDectin-1水平随时间呈显著升高趋势，Mock对照无此现象，同时HiBiT发光法与ELISA检测结果一致，证实sDectin-1可组成性分泌至胞外。
3.3 Dectin-1配体与TNF-α对sDectin-1的上调作用
curdlan刺激以剂量依赖方式升高sDectin-1水平，该效应可被Syk抑制剂剂量依赖性阻断，证实由Dectin-1–Syk通路介导；非Dectin-1依赖性炎症刺激TNF-α同样可剂量依赖上调sDectin-1，表明其释放受双重信号调控。
3.4 sDectin-1与不溶性β-葡聚糖及白色念珠菌的结合
拉下实验显示，sDectin-1可与不溶性β-1,3-葡聚糖（酵母聚糖A、副淀粉）、假菌丝相白色念珠菌结合，结合量随配体浓度升高而增加，且不结合阴性对照β-1,4-葡聚糖纤维素，证实其对不溶性配体的结合特异性。
3.5 sDectin-1与可溶性β-葡聚糖的结合
直接结合实验显示sDectin-1特异性结合包被的β-1,3/1,6-葡聚糖（CSBG），不结合葡聚糖、昆布多糖、curdlan；竞争实验中可溶性β-1,3/1,6-葡聚糖（WGP soluble）可剂量依赖抑制分散型WGP对sDectin-1的共沉淀，进一步证实其对可溶性β-1,3/1,6-葡聚糖的选择性结合能力。
3.6 sDectin-1的结构表征
HiBiT夹心ELISA证实双标签共存于同一Dectin-1分子；免疫印迹显示细胞裂解液中Dectin-1呈25–70 kDa宽弥散带（符合异质性糖基化特征），上清中sDectin-1主要为N端截短形式，但仍保留C端碳水化合物识别域（CRD），具备配体结合的结构基础。
讨论与结论部分指出，sDectin-1并非随机降解产物，而是受炎症信号调控的结构明确的可溶性受体。其释放具有双重调控机制：Dectin-1配体通过受体近端Syk通路诱导释放，TNF-α则通过广谱炎症途径促进释放，该模式与其他可溶性免疫受体类似。结构分析明确其主要为N端截短但保留CRD的功能形式。功能上，sDectin-1保留对不溶性与可溶性β-葡聚糖的特异性结合能力，提示其可能通过两种机制参与免疫调节：一是作为诱饵受体，隔离胞外β-葡聚糖从而减弱过度炎症应答；二是介导反式信号或桥接相互作用，将β-葡聚糖识别信号传递至其他免疫细胞。研究局限性在于细胞系模型无法完全模拟原代免疫细胞生理状态，且尚未在体内验证其功能。综上，该研究首次证实sDectin-1是具有配体结合活性的功能性可溶性受体，为理解抗真菌免疫的调节机制提供了新框架，也为靶向sDectin-1的免疫治疗策略奠定了理论基础。
