五重逆转录液滴数字PCR检测方法的开发：用于同时检测和绝对定量HIV-1、HIV-2、HCV和HBV，并包含内参对照

《ELECTROPHORESIS》：Development of Pentaplex Reverse Transcription Droplet Digital PCR Assay for Simultaneous Detection and Absolute Quantification of HIV-1, HIV-2, HCV, and HBV With Internal Control

【字体：大中小】 时间：2026年05月28日 来源：ELECTROPHORESIS 2.5

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　　摘要本研究开发了一种五重逆转录滴液数字聚合酶链反应（RT-ddPCR）检测方法，用于同时检测和绝对定量人类免疫缺陷病毒（HIV）-1、HIV-2、丙型肝炎病毒（HCV）、乙型肝炎病毒（HBV）以及一

摘要

本研究开发了一种五重逆转录滴液数字聚合酶链反应（RT-ddPCR）检测方法，用于同时检测和绝对定量人类免疫缺陷病毒（HIV）-1、HIV-2、丙型肝炎病毒（HCV）、乙型肝炎病毒（HBV）以及一个内部对照。这些病毒是重要的血液传播病原体，对于诊断、血液筛查和参考材料的验证具有重要意义。目前用于血液筛查的商业试剂盒虽然支持多重检测，但依赖于基于循环阈值的相对定量方法；因此，检测结果可能因参考材料和分析条件的不同而有所差异，这限制了实验室间的可比性。此外，传统的抗原-抗体检测方法和单目标定量聚合酶链反应（qPCR）方法的多重检测能力有限，并且需要标准曲线，从而限制了其广泛应用。该检测方法的检测限（LoD）值为2.42至6.65拷贝/反应，具有高特异性。根据国际标准化组织（ISO）20395:2019标准进行的验证表明，该方法具有线性、灵敏度和精确度，变异系数较低，说明其重复性很高。当使用纳米孔板系统进行评估时，该方法表现出可比的性能，且无统计学上的显著差异，从而证明了其平台的可扩展性。通过使用外部来源的病原体资源（包括在类似临床样本条件下的人血浆来源的HIV-1阳性材料）进一步验证了该方法的适用性，证明了其在超出国际参考材料范围时的可靠检测能力。本研究介绍了一种用于诊断、血液筛查和参考材料质量控制的强大多重检测平台。该方法将定性和定量分析整合到单一工作流程中，实现了高效的多目标检测。

利益冲突

作者声明以下利益冲突。作者已提交了一项与本文主题相关的专利申请。该专利名为“用于同时检测或定量HIV-1、HIV-2、HCV和HBV的试剂盒，能够识别假阴性结果”，申请日期为2025年8月13日，申请号为10-2025-0111973（受理编号1-1-2025-0921245-37）。申请人是成均馆大学产业-学术合作基金会。