基于快速细胞培养的检测方法，用于识别传染性病毒和病毒载体

《Journal of Virological Methods》：Rapid cell culture-based assay for the detection of infectious viruses and viral vectors

【字体：大中小】 时间：2026年05月28日 来源：Journal of Virological Methods 1.6

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巴伐利亚州卫生与食品安全局（LGL），LH7 – 分子生物学分析与基因技术部门，85764 Oberschleissheim，德国

摘要

确定含有病毒颗粒的样本的感染滴度对于临床基因治疗应用至关重要。目前可用的检测病毒/病毒载体感染性的方法耗时较长。在这项研究中，我们开发了基于细胞培养的感染检测方法，能够快速检测多种DNA/RNA病毒/病毒载体。本研究中分析的病毒包括腺病毒5型、腺病毒41型、牛痘病毒、麻疹病毒、柯萨奇病毒B5型、呼吸道合胞病毒以及基于腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒和慢病毒的载体。

将易感细胞与含有感染性病毒/病毒载体的样本共同培养3小时。在所开发的检测方法中，测量了与感染性病毒共同培养3小时的细胞与两个对照组（包括空白对照组和热灭活对照组）之间的Cq值差异（?Cq）。设置对照组是为了检测背景信号。当?Cq大于3.3时，检测结果被视为阳性。

这种可重复且稳定的感染检测方法基于病毒进入细胞的过程。对于所有测试的病毒/病毒载体，与感染性病毒共同培养3小时的细胞与至少一个对照组之间的?Cq均大于3.3，表明该方法具有较高的准确性。用于评估背景信号的空白对照组和热灭活对照组在本研究中的所有病毒/病毒载体检测中均得到了成功应用。

我们开发了一种基于细胞培养的快速检测感染性病毒的方法。该方法适用于所有测试的病毒/病毒载体，有望成为临床病毒学和感染性病毒诊断中的重要工具。

章节摘录

背景

所有病毒都需要活的宿主细胞才能复制。某些病毒可以在允许其复制的细胞系（细胞培养）中体外分离和扩增。病毒在允许其复制的细胞培养中的感染会产生病毒后代，通常会伴随可检测到的细胞病变效应（CPE）。病毒载体是经过基因改造的病毒，用于在目标细胞中转移和表达治疗基因（Bester等人，2006年；Milone和O'Doherty，2018年；Thompson等人，2018年；Poletti和Mavilio，

病毒与病毒载体

腺病毒5型（Ad5）和呼吸道合胞病毒（RSV）由慕尼黑Max von Pettenkofer研究所的病毒学部门提供。腺病毒41型（Ad41）、柯萨奇病毒B5型（CoxB5）和麻疹病毒由巴伐利亚州卫生与食品安全局（LGL；Oberschleissheim）提供，并由Ute Eberle博士提供。本研究中使用的麻疹病毒为Leningrad 16疫苗株，于2018年从国家参考实验室获得

结果

在这项研究中，我们开发了一种基于细胞培养的快速检测方法，用于检测各种DNA病毒、RNA病毒及病毒载体中的感染性颗粒。用于该检测方法的病毒包括Ad5、Ad41、VACV、CoxB5、麻疹病毒以及rAAV2-EGFP、rAd5-EGFP、rLV-EGFP和rMMLV-EGFP等病毒载体。

讨论

只有通过基于细胞培养的检测方法才能检测到感染性病毒颗粒。某些病毒的感染性可以通过观察细胞病变效应（CPE）在允许其复制的细胞培养中进行评估，进而通过系列稀释等方法（如TCID⁵⁰）来测定感染滴度。本研究中采用了后者方法来评估所用病毒的感染滴度。由于病毒复制、后代生成需要1至数天的时间，

资助

本研究由巴伐利亚州环境与消费者保护部资助（资助编号：TGC01GCU-78601）。资助机构对研究设计、数据采集或分析没有施加任何影响。

CRediT作者贡献声明

Maren Haase：撰写、审稿与编辑。Melanie Pavlovic：撰写、审稿与编辑。Anja Ehrhardt：撰写、审稿与编辑、方法学设计、概念构思。Armin Baiker：撰写、审稿与编辑、方法学设计、资金申请、概念构思。Ingrid Huber：撰写、审稿与编辑、资金申请。Ulrich Busch：撰写、审稿与编辑、资金申请。Sevana Khaloian：撰写初稿、方法学设计、实验设计、数据分析、数据整理，

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能影响本文研究的财务利益或个人关系。

致谢

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