《Molecular Therapy》：Ex Vivo Expansion of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells from Human Mobilized Peripheral Blood for Gene Therapy Applications
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圣拉斐尔基因治疗电讯马拉松研究所（San Raffaele Telethon Institute for Gene Therapy，简称SR-TIGET），隶属于IRCCS圣拉斐尔科学研究所，地址：意大利米兰20132
摘要：
体外扩增动员的外周血（mPB）造血干细胞（HSCs）是一种有前景的细胞和基因治疗策略，但通常使用的培养方案会导致干细胞功能丧失，从而限制了其应用。我们通过单细胞RNA测序对mPB扩增培养进行了深入分析，发现这些培养过程中前体细胞的分化路径得以保持，同时干细胞谱系特性也未发生改变。通过识别特定的HSC群体，我们能够估算体外培养中的转导效率，这一效率与异种移植实验及参与基因治疗研究的患者的长期基因标记结果相符。随后，我们开发了一种符合GMP标准、可临床应用的工艺，用于扩增来自儿科患者和成人供体的经慢病毒（LV）转导的HSCs。该工艺通过优化细胞因子补充方案、培养基选择、慢病毒转导时机以及使用特定小分子来抑制分化程序的激活，实现了有效的HSC扩增。与现有的脐带血扩增方案相比，我们的优化工艺在处理mPB时表现更为优异。慢病毒整合位点分析及基于基因组条形码的克隆追踪技术证实了体外培养过程中HSCs能够进行对称性自我更新分裂。这些结果为在即将开展的常染色体隐性骨硬化症基因治疗试验（EU CT 2024-518972-30）中验证该HSC转导/扩增工艺的临床效果提供了依据。
