基于使用情境的跨甲状腺素蛋白免疫测定法的开发与验证：生物标志物检测设计框架

《The AAPS Journal》：Context-of-use–Guided Development and Validation of a Transthyretin Immunoassay: A Framework for Biomarker Assay Design

摘要

转甲状腺素蛋白（TTR）是一种循环蛋白生物标志物，在评估治疗转甲状腺素蛋白淀粉样变性的疗法中起着核心作用。针对TTR的 antisense寡核苷酸药物Eplontersen的临床试验需要一种与现有检测方法不同的检测方法，因此需要一种更灵敏的检测技术。本研究描述了一种基于使用场景框架开发的定量免疫检测方法的过程，包括方法开发、优化和验证。方法开发重点关注校准曲线建模、权重设置、平行性分析以及最低稀释度的确定。抗体的选择和校准品的特性分析遵循了既定的最佳实践。预验证实验优化了抗体浓度并进行了曲线拟合（采用五参数逻辑回归模型，权重为1/y2）。随后通过验证评估了检测方法的性能，包括准确性、精确度、平行性、特异性、稳定性以及内源性结合伙伴的干扰情况，并与其他市售检测方法进行了比较。该检测方法的功能下限定量值为约0.07 mg/dL，这足以检测到治疗后TTR水平降低超过95%的情况。在高稀释度下，检测方法的平行性得到了改善。该检测方法在处理内源性样本、重组TTR变体以及存在潜在干扰因素的情况下均表现出稳健的性能。总分析变异率为29.4%。与市售检测方法的比较显示了高度相关性，尽管绝对数值因检测平台而异。这项工作建立了一种适用于临床研究中的稳健且基于使用场景的TTR定量检测方法。开发过程强调了生物标志物检测设计中的通用原则，包括基质考虑、变异性分析和曲线优化。这些见解为受监管环境下的生物标志物方法开发提供了一个可借鉴的框架。