打开图形查看器
摘要
肿瘤微环境（TME）仍然是癌症免疫治疗面临的主要挑战。在这项研究中，我们进行了针对TME的体内 CRISPR激活（CRISPRa）筛选，以识别促进抗肿瘤免疫的因素，最终得出了合理设计的免疫基因治疗组合。同时激活编码抗原呈递、T细胞增殖、共刺激和迁移（APCM）的基因可以增强抗肿瘤反应。在转移性肿瘤中进行的APCM聚焦CRISPRa筛选确定了Cd80、Tnfsf14、Cxcl10、Tnfsf18、Tnfsf9和Ifng作为主要的免疫刺激候选基因。进一步优化后，发现Tnfsf9（4-1BBL）+ Ifng + Il12b（4II）是一种有效的治疗组合。腺相关病毒（AAV）4II能够增强抗原呈递、T细胞激活、增殖和细胞毒性以及肿瘤浸润。用AAV-4II预处理TME与嵌合抗原受体（CAR）和T细胞受体（TCR）T细胞疗法结合使用，可以在体内抑制原发性和转移性实体瘤。这些发现表明，针对TME的CRISPRa筛选是开发针对实体瘤的免疫基因治疗组合的快速途径。
意义：
通过利用针对TME的体内 CRISPRa筛选，我们识别出了能够增强抗肿瘤免疫的免疫调节基因，并据此设计了基于AAV的合理组合。优化的三基因组合（4II）能够增强抗原呈递和T细胞功能，并与过继性T细胞疗法协同作用，提高实体瘤和转移灶的免疫治疗效果。
数据可用性
本研究生成或分析的所有数据都包含在本文及其补充信息文件中。非NGS实验的原始数据和统计信息在补充表S2的Excel文件中提供。基因组测序的原始数据已存放在GEO数据库中，编号为GSE255517。基因组测序和基因表达（NGS实验）的处理数据以补充表S1中的处理结果形式提供。支持本研究发现的数据、代码和材料可向学术界的相关作者（S. Chen）提出合理请求后获得。
