在多种非生物胁迫条件下，对Corydalis saxicola进行定量实时PCR分析时参考基因的鉴定与验证

《Scientific Reports》：Identification and validation of reference genes for quantitative real-time PCR in Corydalis saxicola under various abiotic stresses

摘要

定量实时PCR（qRT-PCR）是一种常用的基因表达测量方法，但其准确性取决于是否使用稳定的参考基因进行数据标准化。在本研究中，我们评估了Corydalis saxicola中11个候选参考基因在不同组织和三种非生物胁迫条件（Ca2?胁迫、Se2?胁迫和干旱胁迫）下的表达稳定性。通过使用四种分析算法（GeNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder），我们确定了最适合的参考基因：GAPDH2和UBCE2-17适用于不同组织；RPAP3和UBCE2-5A适用于Ca2?胁迫；GAPDH8和α-TUB适用于Se2?胁迫；ACT4和RPAP3适用于干旱胁迫。此外，GAPDH2、TBP和UBCE2-17被认定为最适合作为适用于不同组织和多种非生物胁迫条件的综合参考基因。这些结果通过分析CsBBEL9和CsOMT9（参与苯基异喹啉生物碱合成的关键基因）以及CsANN1和CsANN9（调控胁迫反应的核心基因）的表达模式得到了验证。本研究首次为C. saxicola提供了经过验证的参考基因，为这种稀有药用植物的基因表达分析提供了一种更准确、更可重复的方法，将有助于未来对该植物次生代谢调控和胁迫响应机制的研究。