高效设计与生产糖基化的PEDV刺突蛋白S1亚基

《Scientific Reports》：Efficient design and production of glycosylated PEDV spike S1 protein

摘要

刺突蛋白是冠状病毒的一种结构蛋白，可分为氨基端的S1结构域和羧基端的S2结构域。S1结构域能够与细胞表面的受体结合，因此它含有中和抗体的主要表位，是疫苗开发中的重要免疫原。疫苗研究和蛋白质结构-功能研究需要纯化的蛋白质样本，理想情况下这些蛋白质不应带有任何标签。在本研究中，我们设计了编码猪流行性腹泻病毒（PEDV）S1蛋白的重组载体，在其氨基端添加了组织型纤溶酶原激活剂信号肽和Protein Select?标签。我们证明了该重组蛋白在转染后能够在哺乳动物细胞培养物的上清液中表达，并进一步利用Cytiva公司的Protein Select?树脂成功去除了标签，从而获得了无标签的PEDV S1蛋白。纯化的PEDV S1蛋白通过脱糖、动态光散射、尺寸排阻色谱（结合多角度光散射）、一维和二维天然PAGE以及圆二色性分析进行了全面表征。此外，我们还通过酶联免疫吸附试验（ELISA）验证了该纯化蛋白对高免疫血清的免疫反应性。综上所述，我们成功表达了无标签的PEDV刺突蛋白，并对其进行了全面的纯化和结构分析。