利用新霉素抗性基因引入和氨基糖苷类G418（Geneticin）处理方法消除HeLa细胞中的支原体污染

《Scientific Reports》：Eradication of Mycoplasma contamination in HeLa cells using neomycin resistance gene introduction and aminoglycoside G418 (Geneticin) treatment

摘要

支原体污染在连续细胞培养中仍然是一个持续存在的问题，它会干扰细胞生理功能、改变基因表达，并可能导致实验结果的错误。支原体会对培养的细胞产生深远影响，因此亟需有效的清除策略。在这里，我们开发了一种简单而有效的方法来消除HeLa细胞系中的支原体。我们将新霉素抗性基因引入被支原体污染的细胞中，使其对氨基糖苷类抗生素的细胞毒性具有抗性。随后，使用高浓度的新霉素类似物G418（Geneticin）结合单细胞克隆技术，成功清除了支原体污染。通过针对16S rRNA基因的PCR检测以及使用支原体特异性单克隆抗体的免疫荧光实验，确认了支原体的存在及其被清除的情况。这种基因-抗生素联合方法在技术上简单且非常有效，能够长期清除连续细胞系中的支原体。为了研究支原体污染对细胞功能的影响，我们比较了在清除支原体后的细胞与仍受支原体污染的细胞中，转染GFP和FAM标记报告基因后的蛋白质表达情况。荧光分析显示，清除支原体后的细胞中转染效率和报告基因表达显著提高。我们的研究结果为消除细胞系培养中的支原体污染提供了一种有效方法，从而确保了基于细胞研究的可靠性和实验数据的准确性。