通过双重作用机制绕过IFN-γ诱导的卵巢癌耐药性：NKG2A基因敲除与表达PRAME-TCR的NK细胞结合使用

《Journal of Ovarian Research》：Circumventing IFN-γ induced resistance in ovarian cancer with a double-hit: NKG2A knockout of PRAME-TCR expressing NK cells

　　

摘要

背景

针对实体瘤的NK细胞疗法的成功仍然有限，这可能是由于肿瘤抵抗机制与抑制性配体的上调有关。先前的研究表明，扩增的NK细胞可以裂解卵巢癌细胞并产生IFN-γ。然而，IFN-γ在肿瘤微环境中的分泌会导致旁观肿瘤细胞上的经典HLA I类和非经典HLA-E的上调，从而增强对NK细胞介导的细胞毒性的抵抗。为了克服这种由IFN-γ引起的抵抗，我们开发了针对PRAME（NK: PRAME^{NKG2A KO}）的NKG2A敲除NK: TCR细胞，PRAME是一种在卵巢癌中表达的肿瘤相关抗原。

方法

从外周血单核细胞（PBMCs）中分离出原始NK细胞，用细胞因子刺激，并使用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除编码NKG2A的KLRC1基因。刺激后，这些NK细胞被进一步改造以表达针对PRAME的TCR。将NK: PRAME^{NKG2A KO}细胞与对照的NK: PRAME^{NKG2A WT}和NK: MOCK^{NKG2A KO}细胞进行比较，以评估它们对PRAME阳性卵巢癌细胞系和原代卵巢癌细胞的效应功能。为了模拟促炎性的肿瘤环境，卵巢癌细胞系预先接受了IFN-γ处理。

结果

首先我们观察到，没有进行KLRC1基因敲除的NK: PRAME细胞无法有效裂解经过IFN-γ处理的卵巢癌细胞，无论HLA I类表达是否上调。为了克服HLA-E介导的抑制作用，成功实现了CRISPR-Cas9诱导的KLRC1基因敲除，且这一过程没有对NK: TCR细胞的工程改造、扩增或表型产生负面影响。结果，NK: PRAME^{NKG2A KO}细胞对这些经过IFN-γ处理的肿瘤细胞的细胞毒性增强了。

结论

这种双重靶向策略具有独特优势，能够同时攻击HLA阳性和HLA阴性的肿瘤细胞，促进促炎环境，并提高基于TCR的免疫疗法对卵巢癌及其他实体瘤的治疗效果。