将Prime Editing技术与Split Prime Editors结合应用于大肠杆菌（Escherichia coli），并进一步将其应用于金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的基因组编辑

《Applied Microbiology and Biotechnology》：Adapting prime editing with split prime editors in Escherichia coli and its application to Staphylococcus aureus genome editing

　　

摘要

Prime编辑是一种精确且快速的基因组编辑技术，它利用定制的引导RNA来修改短DNA序列。为了在细菌中应用这项技术，我们使用了Prime Editor 2（PE2）和DeepPrime gRNA设计工具，并评估了其在大肠杆菌和耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）细胞中的基因编辑效率。研究结果表明，由逆转录酶和两个Cas9切割结构域组成的分体PE2具有与完整PE2相当的基因编辑效率。在大肠杆菌中观察到的效率受到目标位点、编辑类型以及外切核酸酶存在与否的显著影响。在MRSA中（作为评估该技术在其他非模式细菌物种中适用性的模型），化脓性链球菌的PE2（SpPE2）的表现优于金黄色葡萄球菌的PE2（SaPE2）。此外，不含逆转录酶的分体SpPE2在MRSA中成功诱导了预期的突变。这项研究证明了Prime编辑在细菌系统中的可行性。