《Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology》：Chromovitrectomy: current evidence, emerging technologies, and practical applications in vitreoretinal surgery
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染色玻璃体切割术通过实现近乎透明的眼内结构的可视化，彻底改变了玻璃体视网膜手术的范式。本综述评估了关键活体染色剂包括亮蓝G（Brilliant Blue G，BBG）、台盼蓝（Trypan Blue，TB）、吲哚菁绿（Indocyanine Green，ICG
染色玻璃体切割术通过实现近乎透明的眼内结构的可视化，彻底改变了玻璃体视网膜手术的范式。本综述评估了关键活体染色剂包括亮蓝G（Brilliant Blue G，BBG）、台盼蓝（Trypan Blue，TB）、吲哚菁绿（Indocyanine Green，ICG）和曲安奈德（Triamcinolone Acetonide，TA）的临床效用，重点关注其理化性质、染色亲和力及安全性特征。近年来染色剂配方的进展，包括高密度制剂和多组分制剂，提升了组织选择性和手术操作便利性。这些药理学创新目前已与数字可视化技术形成互补，例如三维（three-dimensional，3D）抬头显示系统和可定制光谱滤镜，二者可增强对比度感知并改善手术人体工程学。本文进一步探讨了用于识别隐匿性视网膜裂孔的特殊手术策略及序贯染色技术，同时针对光毒性和黄斑保护等关键问题进行了讨论。随着该领域逐步向整合术中光学相干断层扫描（intraoperative Optical Coherence Tomography，iOCT）与人工智能的方向发展，染色玻璃体切割术仍是后段手术的动态基石。理解新型生物相容性制剂与数字平台之间的协同作用，对于优化手术精度和患者预后至关重要。
引言
“染色玻璃体切割术”这一术语由Rodrigues等人于2005年提出，用于描述在玻璃体视网膜手术中应用活体染色剂以增强透明或半透明结构可视化的技术。该技术已成为现代经睫状体平坦部玻璃体切割术（pars plana vitrectomy，PPV）不可或缺的组成部分，使外科医生能够以前所未有的精度识别和操作玻璃体、内界膜（internal limiting membrane，ILM）、视网膜前膜（epiretinal membranes，ERM）及增生性组织。从经验性染色剂应用到循证染色玻璃体切割术的演变，反映了对染色剂-组织相互作用机制的深入理解以及对潜在毒性机制的认知提升。当代染色玻璃体切割术不仅涵盖染色剂选择，还涉及应用技巧、暴露时长、照明参数以及与数字可视化技术的整合考量。本综述全面更新了染色玻璃体切割术的实践进展，纳入了近期关于染色剂安全性与有效性的证据、新兴制剂、数字增强技术及特殊手术技巧，旨在为玻璃体视网膜外科医生提供基于证据的实用指导，以优化手术结局并减少医源性风险。
玻璃体视网膜解剖
玻璃体与玻璃体视网膜界面
理解染色玻璃体切割术的结构靶点需要充分认识玻璃体视网膜界面的解剖结构。玻璃体约含98%的水分，稀疏分布的胶原纤维和透明质酸分子赋予其凝胶样特性。II型胶原是玻璃体胶原的主要成分（占80%），但胶原纤维为异型结构，还含有约20%的IX型胶原及微量V/XI型胶原。现有证据表明，玻璃体总胶原含量在发育过程中保持稳定，青春期略有增加，成年后至衰老阶段均相对恒定。尽管有观点认为玻璃体胶原合成随衰老下降或停止，但成年牛和人类眼球的研究支持胶原更新可持续至成年期，甚至在晚年仍有合成活动。若无持续的胶原合成，预期会出现进行性结构降解，导致玻璃体生物力学特性受损；反之，若胶原合成持续且胶原网络结构完整，则有助于维持玻璃体的机械性能。透明质酸（hyaluronic acid，HA）是一种亲水性糖胺聚糖，有助于维持玻璃体容积，使其具备抗压能力。虽然玻璃体还含有其他蛋白质和糖胺聚糖，但其力学行为和结构完整性主要由胶原和透明质酸的水平及相互作用决定。后玻璃体皮质厚度约为100–300 μm，胶原浓度最高，是与内界膜连接的主要部位。玻璃体劈裂，即后玻璃体皮质内的分层，发生率高达57%，即使在明显的后玻璃体脱离后，仍可能残留皮质玻璃体黏附于视网膜表面。这些玻璃体皮质残余在标准照明下不可见，但经曲安奈德（TA）染色后可清晰显现，凸显了其在黄斑裂孔和增生性玻璃体视网膜病变病理过程中的重要性。
内界膜
内界膜是Müller细胞的基底膜，构成神经感觉视网膜的最内层边界。其厚度在不同视网膜区域存在差异：在玻璃体基底部最薄，向黄斑区逐渐增厚，在黄斑中心凹和视神经处再次变薄。黄斑中心凹处的内界膜厚度为0.5–2.0 μm，旁黄斑区为2.0–3.0 μm。后极部内界膜厚度变异性更大，可能与膜为适应Müller细胞沿视网膜表面的不规则轮廓而变得更起伏有关。在赤道部和后极部，60岁以上供体的内界膜显著薄于60岁以下供体。内界膜为三层结构：外层为稀疏层，与玻璃体皮质接触；中层为致密层；内层为透明层，邻近Müller细胞的终足。内界膜主要由IV型胶原、层粘连蛋白、纤连蛋白和蛋白聚糖组成，这种成分构成决定了其对特定染色剂的染色亲和力。许多此类分子介导内界膜与视网膜之间的黏附，以及皮质玻璃体与内界膜的附着。内界膜基底膜层在黄斑中心凹、视神经乳头和主要血管弓处较薄，此处玻璃体纤维直接与视网膜紧密附着。在黄斑中心凹，Müller细胞层增厚并形成锥形结构，将内界膜与外界膜相连，称为Müller帽。活体染色剂与内界膜和视网膜前膜的差异结合反映了二者不同的蛋白质组学构成：两者均含有IV型胶原和层粘连蛋白，但视网膜前膜的特征是II型胶原上调，存在包括胶质细胞、视网膜色素上皮细胞和肌成纤维细胞在内的细胞成分，以及包含原纤维蛋白-1和肌腱蛋白的细胞外基质蛋白，这种成分差异使得选择性染色策略成为可能。
视网膜前膜与增生性组织
视网膜前膜是发生于玻璃体视网膜界面的纤维细胞增生性病变。早期对手术切除的视网膜前膜标本的形态学分析受限于增生性视网膜前细胞的表型转分化限制。近期的免疫组织化学研究显示，多种细胞类型参与视网膜前膜的发生，包括胶质细胞（Müller细胞、纤维星形胶质细胞和微胶质细胞）、成纤维细胞、肌成纤维细胞、玻璃体细胞、视网膜色素上皮细胞和巨噬细胞。尽管大量研究评估了广泛的分子标志物，但这些细胞的确切来源仍存在争议，研究结果常无定论甚至相互矛盾。无论来源如何，视网膜前膜中的细胞均获得肌成纤维细胞样表型，表现为α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表达，并具有合成和沉积新生细胞外基质的能力。扫描电子显微镜被用于检查特发性视网膜前膜，识别出从内界膜延伸至膜玻璃体表面的四层不同结构模式：薄而交织的纤维层；折叠的纤维材料片层；由致密折叠胶原纤维组成的更厚、更刚性的层；以及包含坏死和/或炎症物质的陷窝区。特发性视网膜前膜主要包含不同程度纤维化的胶质细胞，而增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy，PVR）或糖尿病牵拉性视网膜脱离中的继发性视网膜前膜则包含更多样的细胞群和更致密的胶原基质。板层裂孔相关性视网膜前增生（lamellar hole-associated epiretinal proliferation，LHEP）是一种独特病变，其特征为黄斑表面存在厚的黄白色物质，主要由成纤维细胞、玻璃体细胞和I–III型胶原组成，不含IV型胶原或纤连蛋白。这种独特的成分构成解释了为何LHEP既不染台盼蓝也不染亮蓝G，从而形成特征性的“负染色”模式。
活体染色剂：理化性质与作用机制
亮蓝G
亮蓝G又称考马斯亮蓝G-250，是一种三芳基甲烷类染色剂，分子量为854 Da，于2006年被引入作为染色玻璃体切割术的手术辅助制剂。该染色剂对内界膜的染色强于对视网膜前膜的染色。亮蓝G的分子结构包含三芳基甲烷发色团和磺酸基团，使其具有高水溶性和强蛋白质结合亲和力。亮蓝G通过静电相互作用和疏水相互作用优先与内界膜成分结合：静电结合发生于带负电荷的磺酸基团与带正电荷的氨基酸（赖氨酸、组氨酸、精氨酸）之间，而疏水作用力促进其与芳香族残基（苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸）的相互作用。这种结合特征赋予了其高内界膜选择性，且极少渗透至视网膜深层。用于眼科的商业亮蓝G制剂浓度为0.025%，生理pH值为7.0–7.6，渗透压为301–400 mOsm/L，包括多种市售产品。多项临床前和临床研究表明，0.025%的临床浓度是充分染色与生物相容性之间的平衡点。采用视网膜色素上皮细胞系ARPE-19作为体外模型评估亮蓝G的安全性，结果显示在临床常用浓度（0.25 mg/ml）和暴露时间下，安全性结果可接受；但在更高浓度（>0.5 mg/ml）和更长暴露时间（>5 min）下，多项研究报道了细胞损伤和活力下降的迹象。动物体内模型显示出良好的安全性特征，仅在电生理检查中观察到短暂改变。在临床层面，多项鼓励性的临床前研究结果之后，多项临床研究评估了亮蓝G的安全性，常与既往首选染色剂吲哚菁绿进行比较。黄斑裂孔手术的回顾性和随机研究显示，亮蓝G组与吲哚菁绿组的最佳矫正视力、视野或光学相干断层扫描参数无显著差异，但有证据表明吲哚菁绿治疗患者的明视视网膜电图反应降低。随机和回顾性试验通常报道亮蓝G与吲哚菁绿的功能结局相似，但一项数据库研究发现亮蓝G组的更佳最佳矫正视力和更高的黄斑裂孔闭合率。亮蓝G辅助术后光学相干断层扫描分析显示颞侧黄斑象限变薄，这可能是由于自然解剖易损性或剥除过程中的机械创伤所致，而非染色剂毒性。与曲安奈德相比，两者视觉和解剖结局相似，但曲安奈德与术后一过性眼压升高相关；亮蓝G的最终最佳矫正视力往往优于吲哚菁绿，且与曲安奈德相当。组织学研究显示所有染色剂均改变了内界膜的剥离平面，但吲哚菁绿引起的改变更为显著，而亮蓝G仅引起极少量的细胞碎片残留。大量临床系列研究证实了0.25 mg/ml亮蓝G的总体安全性，未报道与亮蓝G相关的并发症，且视网膜各层测量结果稳定。罕见不良事件如视网膜下迁移伴视网膜色素上皮萎缩也有报道。在其他玻璃体视网膜手术包括视网膜前膜和近视性黄斑劈裂手术中，亮蓝G也显示出良好的安全性特征，未报告显著的毒性。
台盼蓝
台盼蓝是一种四磺化双偶氮染色剂，分子量为961 Da，因其能够染色淀粉样蛋白沉积、胶原纤维和无活性组织而被广泛应用于医学组织学。在眼科领域，它最初被引入用于白内障手术中的连续环形撕囊，随后被证实对视网膜前膜具有特殊的染色亲和力。与亮蓝G不同，台盼蓝可被细胞膜完整性受损的细胞选择性摄取，这解释了其对含有死亡或受损胶质细胞的视网膜前膜而非无细胞的内界膜的亲和力。其作用机制是台盼蓝穿透受损的细胞膜后与细胞内蛋白质结合，产生特征性的蓝色着色；而具有完整细胞膜的活细胞可通过主动膜转运机制排斥台盼蓝。这一特性使台盼蓝能够区分存活组织与非存活组织，该原理也被用于角膜内皮评估。用于玻璃体视网膜手术的台盼蓝浓度范围为0.09%至0.18%。市售的用于玻璃体视网膜手术的眼科制剂有多种。较高浓度（0.15–0.18%）通常用于视网膜前膜和增生性玻璃体视网膜病变膜的染色，较低浓度足以应对细胞较少的组织。台盼蓝也可与IV型胶原结合，因此能对内界膜进行一定程度的染色，但强度低于亮蓝G。多项研究比较了台盼蓝和吲哚菁绿在黄斑手术中的应用。一项纳入40眼的随机对照试验发现，0.5 mg/ml吲哚菁绿与1.5 mg/ml台盼蓝术后最佳矫正视力无显著差异，但二次分析提示台盼蓝组的视力改善更明显。另一项研究显示，使用0.6 mg/ml台盼蓝或未使用染色剂的视网膜前膜手术在12个月时最佳矫正视力或视野无差异，将轻微的黄斑改变归因于膜剥除而非染色剂毒性。一项纳入78例黄斑裂孔眼的适应性随机对照试验表明，内界膜剥除提高了闭合率，且在成功闭合的病例中，台盼蓝组与吲哚菁绿组的最佳矫正视力获益相似。超微结构分析显示台盼蓝辅助剥除并未造成不同的剥离平面或毒性，且使用后未观察到视网膜神经纤维层变薄。多个病例系列进一步支持了台盼蓝在玻璃体视网膜手术中的安全性，在包括视网膜前膜、黄斑裂孔和增生性玻璃体视网膜病变在内的多种适应证中均未报告显著的毒性。
吲哚菁绿
吲哚菁绿是一种两性离子三羰花青类染色剂，分子量为775 Da，最初开发用于肝功能检测和血管造影。其对内界膜层粘连蛋白和IV型胶原的强结合力可产生强烈的绿色染色，这在历史上使其成为内界膜剥除的热门选择。然而，吲哚菁绿的使用引发了显著的安全性担忧，多种机制共同导致潜在的视网膜损伤：首先是渗透压相关毒性，吲哚菁绿粉末用水溶解会产生低渗溶液，可破坏视网膜结构；其次是光毒性，吲哚菁绿的吸收光谱（600–900 nm）与手术光源显著重叠，通过光动力反应产生活性氧；第三是直接细胞毒性，吲哚菁绿通过线粒体途径诱导视网膜色素上皮细胞凋亡，伴随Bax上调与Bcl-2下调；第四是碘化物含量，商业吲哚菁绿含有高达5%的碘化钠，可能促成视网膜毒性。比较吲哚菁绿与其他替代染色剂的荟萃分析一致表明，吲哚菁绿辅助内界膜剥除后的视觉结局较差，且视网膜色素上皮异常的发生率更高。因此，吲哚菁绿的使用已大幅减少，蓝色类染色剂现已成为大多数适应证的优选。
曲安奈德
曲安奈德是一种水不溶性合成皮质类固醇，虽非真正的活体染色剂，但通过独特的机制实现可视化。其不溶性白色晶体吸附于玻璃体凝胶的胶原纤维上，形成可见聚集体，勾勒出原本透明的玻璃体结构。曲安奈德尤其适用于确认后玻璃体脱离、识别明显后玻璃体脱离后的玻璃体皮质残余、在周边玻璃体切割术中可视化玻璃体基底部，以及在糖尿病牵拉病例中检测残留玻璃体。含苯甲醇防腐剂的4%曲安奈德制剂已被超说明书使用数十年，但对苯甲醇防腐剂毒性的担忧促使了专门用于玻璃体切割术的无防腐剂制剂的开发。这些无防腐剂制剂含有4%或8%浓度的均匀晶体分散液，不含防腐剂。Triesence是美国食品药品监督管理局批准用于眼内用途的无防腐剂曲安奈德混悬液，包括手术期间的玻璃体可视化，规格为1 mL安瓿，浓度40 mg/mL，推荐眼内注射剂量为1–4 mg。Trivaris是另一种无防腐剂制剂，以8 mg（80 mg/mL）单剂量注射器供应用于眼内注射。Kenalog因含有苯甲醇作为防腐剂而被超说明书用于类似目的，因此许多外科医生更倾向于使用无防腐剂的复方制剂，典型浓度为40 mg/mL，在玻璃体切割术中，曲安奈德通常在眼内注射前用平衡盐溶液按1:4稀释。一个关键的注意事项是曲安奈德晶体对暴露的神经组织表现出强黏附性。内界膜剥除后不应再使用曲安奈德，因为晶体可沉积在裸露的Müller细胞终足上，已有病例报道持续存在的黄斑沉积物及延迟的视力恢复。
先进染色剂配方
含沉降剂的重染色剂
染色玻璃体切割术的一项重大进展是开发了含有密度增加剂的“重”染色剂配方，以促进靶向递送至后极部。这些配方的比重超过1.02 g/mL，可快速穿过平衡盐溶液下沉至黄斑区，而不会在整个玻璃体腔内弥散。可用的沉降剂包括聚乙二醇，除增加密度外还具有膜稳定和抗氧化特性；氘代水，可使密度提高约10%且化学相互作用极小；二甘油，黏度低于聚乙二醇，改善了注射特性；以及可溶性叶黄素，兼具沉降剂和潜在的光保护作用。重染色剂的优势包括：无需暴露于周边视网膜即可靶向递送至黄斑区、与眼内注射相比稀释因子更低、无需空气填充眼的技术要求、因与组织接触集中而缩短染色时间。商业重染色剂配方包括含4%聚乙二醇的0.025%亮蓝G、含4%聚乙二醇的0.15%台盼蓝联合0.025%亮蓝G，以及含二甘油的新型制剂（结合了作为甲氧基取代亮蓝G衍生物的DDG）。在ARPE-19细胞系中使用聚乙二醇的研究表明，与单独使用台盼蓝、单独使用亮蓝G或两者联用但不含聚乙二醇相比，聚乙二醇可降低染色剂毒性。
亮蓝G衍生物
新型亮蓝G衍生物通过结构修饰增强了内界膜选择性并减少了视网膜渗透。三种专利化合物——纯苄基亮蓝G、DDG和甲基亮蓝G（Blulife）——对二苯胺氮原子进行了结构修饰，增加了亲脂性和疏水蛋白质相互作用。计算机分子对接和体外结合研究表明，与传统的亮蓝G相比，纯苄基亮蓝G与纤连蛋白疏水残基表现出更强的范德华相互作用。离体实验证实纯苄基亮蓝G被内界膜截留，几乎不向视网膜深层扩散，可能提供更优的安全性特征。DDG（含甲氧基而非乙氧基）比亮蓝G在染色过程中具有更高的透明度，在保持同等蛋白质结合能力的同时改善了后极部的可视化，目前临床比较数据有限，但早期经验表明其疗效相当且可视性可能有所增强。
联合染色剂配方
联合使用亮蓝G和台盼蓝可发挥二者互补的结合特征——亮蓝G针对内界膜，台盼蓝针对细胞性视网膜前膜成分——从而实现多种组织类型的同步可视化。这些“双重”染色剂使外科医生能够根据差异染色模式区分内界膜与上覆的视网膜前膜：均匀的蓝色提示主要为内界膜；强烈的局灶性染色提示含有细胞成分的视网膜前膜；斑片状染色提示混合性内界膜/视网膜前膜且细胞含量不均；而无染色提示板层裂孔相关性视网膜前增生、玻璃体劈裂或高细胞密度组织。可用的联合配方包括0.15%台盼蓝+0.025%亮蓝G+4%聚乙二醇、0.18%台盼蓝+0.03%甲基亮蓝G+增稠剂，以及0.09%台盼蓝+0.025% DDG+2.6%二甘油。其中最后一种是目前唯一由台盼蓝与DDG（一种替代亮蓝G的新型无毒染色剂）联合，并以二甘油作为渗透性良性密度增强剂的配方。使用二甘油替代聚乙二醇聚合物可将染色剂溶液中的台盼蓝浓度从0.15%降至0.09%，同时保持相同的染色水平。比较研究表明，联合染色剂在保持各组分浓度处于既定安全阈值的前提下，提供与单一染色剂等效或更优的染色效力，且无毒性增加。有研究分析了亮蓝G和台盼蓝对ARPE-19细胞的联合效应，发现0.025%的亮蓝G在5分钟和30分钟孵育时可保护细胞免受台盼蓝诱导的损伤。从实践角度来看，更重、更具黏度的联合配方，特别是那些含有聚乙二醇或其他增稠剂的配方，可能需要比单体亮蓝G溶液更长的眼内抽吸时间才能完全清除。
叶黄素基配方
叶黄素是一种天然存在的叶黄素类胡萝卜素，代表了一种结合染色能力与潜在光保护作用的新颖方法。其两亲性结构使其能够与疏水性胶原成分和亲水性膜界面发生相互作用，其作用机制不同于化学染色剂结合。叶黄素基染色剂的拟议优势包括蓝光过滤特性（吸收峰445 nm）、减少活性氧生成的抗氧化能力、可能降低细胞毒性的不同相互作用机制，以及得益于叶黄素和玉米黄质的抗氧化特性的潜在视网膜神经保护作用。一种叶黄素基玻璃体染色剂（LB-VD；Vitreo Lutein）的推出为曲安奈德基制剂提供了潜在更安全的替代选择。叶黄素与台盼蓝或亮蓝G联合使用也能更好地可视化视网膜前膜。一项随机临床试验比较了叶黄素基染色剂（0.15%台盼蓝+0.05%亮蓝G+2%叶黄素）与标准双重染色剂（0.15%台盼蓝+0.025%亮蓝G+4%聚乙二醇）及吲哚菁绿在视网膜前膜手术中的应用，结果显示叶黄素组在早期随访时视力恢复更快、黄斑敏感性更好，尽管差异在6个月时趋于均衡。组织病理学分析显示，叶黄素处理眼中剥除的内界膜标本的胶质纤维酸性蛋白表达降低，提示Müller细胞创伤更小。
临床应用与手术技巧
黄斑裂孔手术
内界膜剥除已成为全层黄斑裂孔的标准治疗方法，初次手术闭合率超过90%。鉴于亮蓝G或其复合制剂的选择性和安全性特征，它们是内界膜可视化的优选。手术技巧考量包括：输注暂时减流，将染色剂缓慢注射至黄斑区以减少湍流；通常30–60秒的染色时间已足够，需遵循制造商建议；在开始剥除前通过笛针或主动切割头抽吸完全移除染色剂；在染色剂接触期间降低照明强度并保持与黄斑的安全距离。看似微弱的内界膜染色常是由于残留的皮质玻璃体遮盖了下方的基底膜，此时可在染色区域尝试轻柔的初步剥除，可能会暴露下方染色良好的内界膜，通常无需重复注入染色剂。对于巨大或慢性黄斑裂孔，内界膜翻转瓣技术需要充分的组织可视化。部分外科医生会进行初始染色剂注射，部分剥除以制作瓣，然后轻柔地进行第二次注射以确认瓣的位置，但需注意在暴露的视网膜上重复染色会增加毒性风险，应尽量减少。比较亮蓝G辅助与吲哚菁绿辅助内界膜剥除治疗全层黄斑裂孔的荟萃分析表明，亮蓝G组的视觉结局更优，包括更好的最终视力和更低的暗点发生率。
视网膜前膜手术
视网膜前膜手术受益于对细胞膜成分（台盼蓝）和下方内界膜（亮蓝G）均有亲和力的染色剂。联合双重染色剂或序贯染色方案使外科医生能够识别视网膜前膜的范围和边缘、在剥除过程中区分视网膜前膜与内界膜、在视网膜前膜剥除后确认内界膜是否完全去除，并通过其特征性的不染色模式识别板层裂孔相关性视网膜前增生。“负染色”技巧：单独使用亮蓝G时，视网膜前膜表现为未染色的区域，与周围蓝色染色的内界膜形成对比，这使得无需担心台盼蓝相关问题即可识别视网膜前膜，便于从视网膜前膜-内界膜交界处开始剥除，并在合适的病例中实现整块联合剥除。对于复发或继发性视网膜前膜，可能需要使用联合染色剂进行更强化的染色以界定纤维化组织平面。尤其是增生性玻璃体视网膜病变膜，使用更高浓度的台盼蓝（0.15–0.18%）可增强对常较隐匿的增生性组织的可视化。
视网膜脱离手术
视网膜脱离手术提出了独特的染色玻璃体切割术挑战，需要可视化多种组织类型，包括玻璃体、增生性膜和视网膜裂孔。系统性的染色剂应用方法可显著改善手术结局。玻璃体可视化方面，曲安奈德仍是玻璃体可视化的首选制剂，关键应用包括：后玻璃体脱离确认，将曲安奈德注射至视盘上方，产生可见的湍流模式，平滑弥散提示完全后玻璃体脱离，而局部聚集提示残留附着；玻璃体皮质残余识别，在明显的后玻璃体脱离后，曲安奈德可显示持续的皮质玻璃体，其在增生性玻璃体视网膜病变中可作为细胞增生的支架，这在视网膜脱离手术中尤为重要，因为完全的玻璃体切除与降低复发风险相关；玻璃体基底部可视化，对于糖尿病牵拉性视网膜脱离和巨大视网膜裂孔，曲安奈德辅助识别玻璃体基底部范围可实现更完全的周边玻璃体切除。操作技巧为应以中等速度注射曲安奈德，使晶体嵌入玻璃体结构中，立即抽吸多余的晶体；随着手术进行，晶体逐渐被清除，染色效果会减弱，长时间手术可能需要重复应用。增生性玻璃体视网膜病变膜识别方面，增生性玻璃体视网膜病变膜因其细胞含量多变且外观常较隐匿而带来特殊的显影挑战，0.15–0.18%浓度的台盼蓝可有效染色增生性玻璃体视网膜病变膜的细胞成分，促进完全切除。在硅油取出术中，可使用台盼蓝在硅油下识别残留的增生性玻璃体视网膜病变膜，从而在硅油-平衡盐溶液交换前进行靶向膜剥除，该技巧可识别亚临床复发增生，否则可能导致再次脱离。视网膜裂孔识别方面，台盼蓝的一个重要但未充分利用的应用是在视网膜脱离手术中识别隐匿性视网膜裂孔，当术前检查未能确定致病裂孔时，该技巧尤为有价值。操作技巧为在视网膜下液引流和全氟化碳液体辅助视网膜平复后，将稀释的台盼蓝（通常与平衡盐溶液按1:1比例混合）注射至疑似裂孔位置，染色剂通过通畅的视网膜裂孔流入视网膜下间隙，通过其可见的染色剂流确定裂孔位置；或者可通过视网膜切开术将台盼蓝注入视网膜下，当使用全氟化碳液体将其挤出时，染色剂会从裂孔溢出。有研究描述了使用41G套管进行视网膜下注射的技巧，证明在标准可视化失败的情况下成功识别了裂孔。该技巧存在视网膜色素上皮直接接触染色剂的理论毒性风险，但临床报告显示，使用稀释制剂短暂接触并未引起显著的不良反应。该技巧在下方视网膜脱离伴多发潜在裂孔、高度近视眼伴周边变性、初次手术成功后再次脱离以及儿童视网膜脱离（配合度限制了检查）等情况中已被证实特别有价值。复杂视网膜脱离的序贯染色方案为：第一步，初始应用曲安奈德，确认后玻璃体脱离状态并识别残留的玻璃体皮质残余，完成彻底的核心和周边玻璃体切除后完全清除曲安奈德；第二步，应用台盼蓝用于膜/裂孔识别，0.15%台盼蓝用于界定增生性玻璃体视网膜病变膜和/或隐匿性视网膜裂孔；第三步，如需评估内界膜，在台盼蓝清除后应用亮蓝G，适用于需要内界膜剥除以处理黄斑病变或降低增生性玻璃体视网膜病变复发风险的病例。为了在最大限度提高组织表面的染色对比度，可在台盼蓝应用前进行可选的空气/平衡盐溶液交换；在空气下染色可最小化染色剂稀释并增强膜界面的浓度。经过短暂的停留时间后，进行第二次平衡盐溶液/空气交换以置换多余未结合的染色剂，并建立适合后续步骤的液体界面。随后注入全氟化碳液体，其具有双重作用：机械性填塞以稳定和展平脱离的视网膜，以及进一步增强组织染色强度。随后在全氟化碳液体下进行膜剥除和视网膜裂孔处理。这种系统方法确保每个组织类型都得到充分可视化，同时通过每次应用之间完全清除染色剂来最小化累积暴露。黄斑保护策略方面，已描述了多种技巧以保护黄斑裂孔边缘或黄斑组织免受染色剂暴露或机械创伤：全氟化碳液体气泡保护，在染色剂注射前在黄斑裂孔上方放置小的全氟化碳液体气泡，防止染色剂进入视网膜下间隙和与视网膜色素上皮直接接触；黏弹剂保护，将黏弹性物质（如透明质酸钠）置于黄斑上方可减少染色剂在裂孔边缘的浓度，但这也会影响可视化；自体血保护，对于内界膜翻转瓣技术，将自体血应用于瓣上可促进黏附，同时形成屏障阻止染色剂渗透。
数字可视化与染色玻璃体切割术
三维抬头显示手术系统的引入，代表了玻璃体视网膜手术可视化的范式转变。这些系统采用高动态范围相机捕捉手术野图像，经过处理后显示在大型3D监视器上，外科医生通过被动偏振眼镜观看。其最重要的优势之一是能够在显著降低眼内照明水平的条件下操作，数字增益补偿使得在据称仅为传统光强度10–50%的水平下即可实现充分可视化，鉴于活体染色剂与光照暴露的协同毒性已得到公认，这种降低可能显著提高染色玻璃体切割术的安全性。数字处理放大了染色与未染色组织之间的细微色差，使染色可视化比通过传统光学显微镜更明显。外科医生可以在术中调整RGB通道平衡，增加蓝色通道增益可改善亮蓝G和台盼蓝的可视化，而绿色通道调整可能有助于在翻修手术中识别残留的吲哚菁绿。对比度增强算法可进一步放大膜边缘，但过度增强可能引入伪影，需要根据外科医生经验进行优化。先进生态系统还集成了专门的数字模式，如Light Sentry黄色滤镜，可选择过滤高能短波蓝光，确保符合无晶状体危害标准，这在染色玻璃体切割术的空气界面阶段尤为关键，因为折射率的改变往往会加剧光散射和眩光。通过优化光谱分布，黄色滤镜可在延长复杂手术过程中减轻光致黄斑损伤的风险，同时增强染色的前视网膜组织的对比度。大屏幕显示还可实现学员和工作人员的实时观摩，提高教学效率和
