《Frontiers in Pharmacology》：Efficacy of hyaluronic acid and butyroyl glutathione in the management of glaucoma-related ocular surface disease: a prospective, interventional, double-blind, cross-over post market study
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摘要：引言：评估含透明质酸(HA, 0.2%)与丁酰谷胱甘肽(GSH-C4, 0.4%)的新型滴眼液在青光眼相关性眼表疾病(G-OSD)中的疗效，并通过基础、炎症及氧化应激条件下的人角膜上皮细胞划痕愈合实验及细胞因子调节实验探讨其潜在作用机制。方法：本初步假设
摘要：引言：评估含透明质酸(HA, 0.2%)与丁酰谷胱甘肽(GSH-C4, 0.4%)的新型滴眼液在青光眼相关性眼表疾病(G-OSD)中的疗效，并通过基础、炎症及氧化应激条件下的人角膜上皮细胞划痕愈合实验及细胞因子调节实验探讨其潜在作用机制。方法：本初步假设生成型前瞻性双盲交叉研究中，16例伴干眼症状的青光眼或高眼压症患者随机接受HA单药或HA+GSH-C4治疗4周，中间设1周洗脱期。临床终点包括眼表疾病指数(OSDI)、FACES量表、泪膜破裂时间(TFBUT)、Schirmer试验及美国国家眼科研究所(NEI)荧光素染色评分。于多个时间点定量检测泪液细胞因子。体外实验采用人角膜上皮细胞进行划痕愈合实验及细胞因子谱分析。结果：16例中15例完成研究。相比单纯HA，HA+GSH-C4显著改善OSDI(p<0.001)、FACES评分(p=0.012)、TFBUT(p<0.001)及NEI荧光素染色评分(p<0.001)，未观察到治疗相关不良事件。泪液细胞因子分析显示特定介质(如IFN-γ、IL-12p70)出现可逆的治疗特异性升高，符合受控的促修复反应。HA+GSH-C4加速上皮创面闭合，并在所有测试条件下选择性抑制单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1/CCL2)。讨论：HA+GSH-C4制剂改善G-OSD症状及眼表稳定性，伴泪液动态细胞因子反应，支持其临床实用性及通过屏障修复与眼表免疫应答调节发挥双重作用的机制。
本研究发表于《Frontiers in Pharmacology》。
研究背景
青光眼患者长期使用含苯扎氯铵等防腐剂的降眼压药，可诱发青光眼相关性眼表疾病(Glaucoma-related Ocular Surface Disease, G-OSD)，患病率约40%–59%。前列腺素F2α类似物及防腐剂引起眼表慢性炎症、活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)累积致谷胱甘肽(Glutathione, GSH)耗竭及caspase-1/炎性体活化，单纯透明质酸(Hyaluronic Acid, HA)人工泪液无法阻断此多重病理环路。丁酰谷胱甘肽(Butyroyl Glutathione, GSH-C4)为可穿透细胞的GSH衍生物，具抗氧化与免疫调节特性，但此前未见眼科应用报道。研究人员旨在评价含HA(0.2%)+GSH-C4(0.4%)新型滴眼液对G-OSD的临床疗效并阐明其促进上皮修复与调节细胞因子的潜在机制。
主要关键技术方法
研究人员在意大利罗马"Tor Vergata"大学医院青光眼门诊招募确诊青光眼或高眼压且合并干眼(OSDI>13、NEI荧光素染色>2、TFBUT<10 s、Schirmer I >10 mm/5 min)的患者16例，行前瞻性双盲随机交叉试验——序列1先滴HA对照4周→1周洗脱→HA+GSH-C4实验制剂4周，序列2反之，每2周随访。临床评估OSDI、FACES量表、TFBUT、Schirmer I试验、NEI荧光素染色；用Schirmer纸条采集泪液经离心后通过LEGENDplexTM人炎症因子13-plex流式细胞术检测IL-1β、IFN-α2、IFN-γ、TNF-α、MCP-1(CCL2)、IL-6、IL-8(CXCL8)、IL-10、IL-12p70、IL-17A、IL-18、IL-23、IL-33。体外采用人角膜上皮细胞(Human Corneal Epithelial Cells, HCEpiC)进行划痕(Scratch-wound)愈合实验，于基础、脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)诱导炎症及过氧化氢(H2O2)诱导氧化应激条件下分别加入HA单药或HA+GSH-C4，观察24 h及48 h创面闭合率并用ImageJ分析；收集上清同法测细胞因子。统计分析采用配对Wilcoxon符号秩检验、Bonferroni–Holm校正、混合效应模型检验序列效应(携带效应)，Spearman相关分析。
研究结果
3.1 Clinical outcome measures（临床结局指标）
15例完成（平均年龄71.3±9.6岁）。HA+GSH-C4相比HA单药显著降低OSDI评分(25.26±2.9 vs 20.11±2.35, p<0.001)、改善FACES评分(3.30±0.86 vs 2.38±0.19, p=0.012)、延长TFBUT(5.81±0.35 s vs 7.31±0.57 s, p<0.001)、降低NEI荧光素染色评分(4.17±0.34 vs 3.81±0.23, p<0.001)；Schirmer试验值无统计学差异(p=0.054)，混合效应模型未见序列效应，提示无显著洗脱残留影响。结论：联合制剂改善主观症状、泪膜稳定性及角膜上皮完整性，但不增加基础泪液分泌量。
3.2 Patient-reported outcome measures (PROMs)（患者报告结局）
OSDI与FACES评分改善趋势在GSH-C4先用序列(Sequence 2)更显著，印证上述临床指标变化且无携带效应。
3.3 Evaluation of cytokines and chemokines in tears during clinical study（泪液细胞因子/趋化因子评估）
HA+GSH-C4处理1个月后，GSH-C4先用序列泪液中IFN-α2、IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-12p70、IL-23、IL-33较基线显著升高(p=0.015~0.044)，IL-1β、MCP-1、IL-8、IL-10、IL-18无变化；洗脱后部分回落，其中IFN-γ与IL-12p70仍高于基线(p<0.05)，提示可逆性Th1偏倚的短暂免疫激活。单纯HA组细胞因子谱基本不变。结论：HA+GSH-C4诱发受控的、可逆的修复相关细胞因子升高，非持续促炎状态。
3.4 The correlation of cytokines with clinical parameters after HA + GSH-C4 treatment in vivo（体内治疗后细胞因子与临床参数相关性）
基线时NEI染色与IFN-γ、IL-8、IL-10、IL-17A、IL-23、IL-33正相关，反映基础炎症损伤关联。HA+GSH-C4治疗1个月后，NEI染色与MCP-1(r=-0.743, p=0.001)、IL-10(r=-0.533, p=0.033)负相关；Schirmer值与IFN-α2、IFN-γ、TNF-α、MCP-1、IL-6、IL-12p70、IL-17A、IL-23等多因子显著正相关。结论：治疗后细胞因子模式从损伤相关性转为与泪液分泌改善及症状缓解相关的修复性微环境。
3.5 The GSH-c4-containing eye drop formulation promotes in vitro damage repair under stress conditions（含GSH-C4滴眼液在应激条件下促进体外损伤修复）
基础、LPS及H2O2应激条件下，HA+GSH-C4 25 μL与50 μL剂量均较对照组显著加速HCEpiC划痕闭合(p≤0.009~<0.001)，单纯HA仅在50 μL基础条件有作用，LPS及H2O2下无显著效果。结论：GSH-C4赋予HA制剂在炎症及氧化应激下更强的角膜上皮迁移/修复能力。
3.6 Evaluation of cytokines modulation during wound healing in vitro model（体外伤口愈合模型中细胞因子调节评估）
HCEpiC上清中HA+GSH-C4在所有条件(基础/LPS/H2O2)下显著抑制MCP-1(CCL2)分泌(p≤0.009~<0.001)，对IL-6、IL-10无明显影响；单纯HA高剂量在H2O2下轻度抑制IL-6、IL-10。结论：联合制剂选择性下调促炎趋化因子MCP-1，可能是其减轻眼表炎症的机制之一。
讨论与结论（翻译浓缩）
本初步假设生成型双盲交叉研究表明，含0.2% HA及0.4% GSH-C4的新型滴眼液可显著改善G-OSD患者的主观症状(OSDI、FACES)、延长TFBUT、减轻角膜荧光素染色，而不改变泪液分泌量，提示其作用在于改善泪膜质量及上皮–黏蛋白界面而非刺激泪腺。泪液细胞因子谱显示HA+GSH-C4诱发短暂、可逆的Th1/Th17相关介质(IFN-γ、IL-12p70等)升高，伴持续Th1极化信号，符合受控的促修复免疫反应而非有害炎症；体外实验证实该制剂在基础、LPS炎症及H2O2氧化应激下加速角膜上皮划痕闭合，并在细胞水平选择性抑制MCP-1。综上，HA+GSH-C4通过眼表屏障稳定与适应性促修复免疫调节双重机制改善G-OSD，是具前景的G-OSD辅助治疗策略，尚需大样本多中心长期随访验证。
