比较浮聚法(Flotation Technique, FT)与Mini-FLOTAC?(MF)粪便诊断法(copro-diagnostics)监测金豺(Canis aureus)肠道寄生蠕虫(helminth)感染性能的评估研究

《International Journal for Parasitology》：Comparing Performance of Copro-Diagnostics for Monitoring Intestinal Parasitic Infections in The Golden Jackal (Canis aureus)

　　

摘要：金豺(Canis aureus)因其适应人类主导景观生存的能力，被视为欧洲新兴寄生虫向家养动物传播的潜在桥介宿主(bridge host)。随着该物种在欧洲范围内的持续扩张，粪便显微镜检查(copromicroscopy)为获取流行病学数据提供了相较于基于剖检(necropsy)方法的非侵入性替代方案，但其在金豺中的诊断性能此前尚未被评估。研究人员比较了两种粪便显微检测技术——浮聚法(Flotation Technique, FT)与Mini-FLOTAC?(MF)——相对于目前线虫及绦虫检测的参考标准"刮取-过滤-计数技术(Scraping, Filtration and Counting Technique, SFCT)"的性能，并评估了二者间的一致性。研究对84只金豺的肠内容物及对应的粪便标本进行了检测。针对各检出分类单元（犬弓首蛔虫 Toxocara canis、狐毛首线虫 Trichuris vulpis、圆线科线虫(strongylids)、中殖孔绦虫属 Mesocestoides spp.及带绦虫属 Taenia spp.），估算了FT与MF相对于SFCT的灵敏度(Sensitivity)与特异度(Specificity)。利用非参数检验及Logistic回归模型探讨了成虫荷虫量(parasite burden)与粪便显微检测阳性之间的关联。采用一致性(concordance)及Gwet's γ(AC1)指数评估FT与MF间的一致度。结果显示，FT与MF均能检出SFCT确认存在的主要蠕虫种类，但灵敏度较低，介于28.6%至56.5%之间。对于大多数分类单元，寄生虫感染强度(intensity)对粪便显微检测阳性率无显著影响，且MF定量结果(EPG)未呈线性反映成虫负荷。两方法诊断性能相当，表明其选用可依据实际操作限制及研究目的决定。尽管存在局限，粪便显微技术在豺种群流行病学监测中仍为有用工具，前提是使用充足样本量并在估算流行率时根据检测灵敏度与特异度进行校正。

论文解读：金豺肠道寄生虫粪便显微诊断方法的性能评估

本研究由Elisabetta Ferraro、Paola Beraldo、Erica Marchiori、Giulia Simonato、Francesca Vianello、Sabrina Iraci、Mauro Giammarino、Alessandro Massolo及Rudi Cassini共同完成，发表于《International Journal for Parasitology》。

研究背景与目的

金豺(Canis aureus)是中型野生犬科动物，具高度生态可塑性及广食性，自20世纪80年代起从巴尔干半岛向西扩张并已定居意大利多个大区，被认为是人畜共患及兽医学上重要寄生虫（如细粒棘球绦虫 Echinococcus granulosus s.l.、多房棘球绦虫 E. multilocularis、犬弓首蛔虫 Toxocara canis 及带绦虫属 Taenia spp.）的储存宿主及桥介宿主(bridge host)。现行野生动物健康监测主要依赖路毙或意外死亡个体的剖检(necropsy)，存在耗时、采样偏差（偏向路边发现的年轻扩散个体）且无法涵盖偏远区域自然死亡个体等缺陷。粪便显微检查(copromicroscopy / copro-diagnostics)作为非侵入性手段具操作简便、成本低廉的优势，但其对金豺肠道蠕虫(helminth)的诊断性能从未被验证。因此，研究人员旨在：(1)以剖检肠道刮取-过滤-计数技术(Scraping, Filtration and Counting Technique, SFCT)为参照金标准，评估常规浮聚法(Flotation Technique, FT)与Mini-FLOTAC?(MF)检测金豺肠道蠕虫的灵敏度(sensitivity)与特异度(specificity)；(2)评价FT与MF检测结果间的一致性。

主要关键技术方法

研究人员收集2009年2月至2025年1月意大利弗留利-威尼斯朱利亚(Friuli Venezia Giulia, FVG)地区路毙金豺84只，剖检前采集直肠粪便。肠道经-80℃深冻灭活棘球绦虫卵后行SFCT参照检测（纵向切开冲洗、刮取黏膜、过筛<1,000、500、250、75 μm>、立体显微镜下分离鉴定计数成虫）。足量粪便(≥2 g)行硫酸锌(ZnSO₄)浮聚液(比重Specific Gravity, SG=1.350)的FT（定性）与MF（定量，计数每克卵数Eggs Per Gram, EPG，乘子5），按形态学鉴定虫卵至可分辨分类阶元。统计学上计算各分类单元灵敏度/特异度(Clopper-Pearson精确法)含剔除单条/单性感染之"校正(corrected)"值；用Mann–Whitney U检验、单变量Logistic回归(log₁₀转化虫荷)及Spearman秩相关分析成虫强度与粪检阳性/EPG关系；采用一致性率及Gwet's γ(AC1)评估FT与MF一致性。

研究结果

3.1. SFCT findings（SFCT检测结果）

84份肠道经SFCT检出7种线虫（含 T. canis、T. vulpis、狭头钩口线虫 Uncinaria stenocephala、犬钩口线虫 Ancylostoma caninum 等）、3种绦虫（Mesocestoides spp.、Taenia spp.、犬复孔绦虫 Dipylidium caninum）及2种吸虫（Alaria alata、Metagonimus spp.）。粪检仅能识别 T. canis、T. vulpis、圆线科线虫(strongylids)、Mesocestoides spp.及 Taenia spp. 虫卵，Physaloptera sp.、Pterygodermatites affinis、D. caninum 未检出。SFCT显示 Taenia spp. 表观流行率最高(39.3%)，圆线科线虫28.6%，T. canis 14.3%，各虫体呈聚集分布(aggregation parameter k 低)。

3.2. Copromicroscopy performances（粪便显微诊断性能）

以SFCT为参照，FT对线虫灵敏度低至中等：T. canis 50.0%(校正75.0%)、T. vulpis 33.3%、圆线科线虫56.5%(校正64.7%)；MF灵敏度相似：T. canis 28.6%、T. vulpis 33.3%(校正100%置信区间宽)、圆线科线虫52.9%。绦虫灵敏度极低：FT检测 Mesocestoides spp. 11.1%、Taenia spp. 18.2%；MF分别为16.7%与29.4%。所有分类单元特异度均高(强圆线科略降至约85%-87%，余多为93.6%-100%)。成虫荷虫量与粪检阳性关联仅在FT检测圆线科线虫达显著(Mann–Whitney U, p=0.037; Logistic回归 p=0.050)，余分类单元(含 Taenia spp.)及MF检测圆线科线虫均无显著关联。MF的EPG计数与成虫虫荷Spearman相关系数普遍低且无统计学意义，提示粪卵计数不线性反映成虫负荷。

3.3. Agreement assessment（一致性评估）

FT与MF一致性率87%(圆线科线虫)~100%(T. canis及Mesocestoides spp.)；Gwet's γ(AC1)指数：T. canis与Mesocestoides spp.为1.00(完美一致)，T. vulpis 0.95、Taenia spp. 0.89(实质一致)、圆线科线虫0.77(较好一致)，表明两方法诊断判定高度吻合。

讨论与结论总结

讨论指出此为首次针对金豺粪便显微蠕虫检测性能的验证研究。低灵敏度与野生犬科既往报道一致，归因于卵间歇性排出、潜隐期(prepatent period)、深冻损伤薄壳虫卵(如钩虫、Pterygodermatites)及绦虫节片不连续排落等生物学因素；高特异度(>90%)支持粪检虫卵可确认为成虫定植。MF与FT性能无显著差异，选用可依实操考量（MF可提供定量EPG但生态学解释受限）。虽低估真实流行率，粪检可用于种群水平监测，建议依本研究提供之灵敏度/特异度校正面表观流行率(apparent prevalence)以获取真流行率(true prevalence)。低流行或难检虫种（尤其绦虫及Mesocestoides）推荐辅以粪便DNA(copro-DNA)分子检测。

结论(Conclusions)：FT与Mini-FLOTAC?(MF)均具低灵敏度但高特异度，可检出主要人畜共患及兽医相关蠕虫。种群水平监测中粪便显微技术具实用价值，须确保足够样本量并以本研估得之灵敏度与特异度校正流行率估计值。分子诊断可提升低流行绦虫等检出但对全蠕虫群落筛查成本高昂。本研究为金豺蠕虫流行病学监测提供实证校正参数，有助于"同一健康(One Health)"框架下野生动物-家畜界面人畜共患病风险评估。