巴西东南部食蚁兽(anteater)中克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)的分子检测证据及其对野生传播网络(sylvatic transmission network)的意义

《International Journal for Parasitology: Parasites and Wildlife》：Trypanosoma cruzi in anteaters from southeastern Brazil: molecular evidence and implications for sylvatic transmission networks

　　

人为环境改变加强了野生动物、家养动物与人类之间的相互作用，重塑了寄生虫的传播动态。在此背景下，食蚁兽可能在克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)的野生传播网络(sylvatic transmission network)中作为重要宿主发挥作用。本研究调查了巴西圣保罗州食蚁兽中T. cruzi的发生情况及分子特征。研究人员采集26只个体的全血样本，采用靶向18S rRNA基因的PCR检测，并进行测序及贝叶斯系统发育推断(Bayesian phylogenetic inference)。T. cruzi DNA检出率为42.3%（11/26）。序列分析显示与GenBank中参考毒株高度相似（93.66–99.65%），系统发育重建确认所有序列均聚类于T. cruzi分支内且种内分化低。感染状态与宿主种类(p = 0.348)、性别(p = 1.000)、年龄阶段(p = 0.674)及采样季节(p = 0.275)均无显著关联，表明这些因素在本研究群体中不是感染的决定因素。阳性个体分布于多个市镇，在空间上集中于圣保罗州中西部，提示寄生虫在受人为影响景观中广泛流行。尽管因机会性采样未能建立明确时间模式，但不同年份均检出感染个体，支持T. cruzi在这些宿主种群中的持续存在。本研究提供了巴西南部食蚁兽感染T. cruzi的分子证据，强化了其作为野生传播网络中宿主的相关性。结果强调了野生动物在维持寄生虫循环中的作用，并指出需结合分子、生态与流行病学数据的整合方法来深入理解宿主—寄生虫动态及潜在传播界面。

本文发表于《International Journal for Parasitology: Parasites and Wildlife》。

研究背景与目的

恰加斯病(Chagas disease)病原体克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)的野生传播循环(enzootic cycle)依赖于哺乳动物储虫宿主(reservoir host)与锥蝽(triatomine)媒介。约75%的新发与再现传染病具人畜共患(zoonotic)起源，人为环境改变如生境破碎化可改变媒介分布与宿主群落结构，强化物种间接触并重塑传播网络。异关节目动物(Xenarthra)，包括大食蚁兽(Myrmecophaga tridactyla)和南方小食蚁兽或称二趾食蚁兽(Tamandua tetradactyla)，与锥虫类(trypanosomatid)长期协同进化，既往研究证实其自然感染T. cruzi且常无临床症状，并能维持稳定感染伴较高血内原虫密度(parasitemia)，是锥蝽的重要感染源；二趾食蚁兽还具有树栖—地栖双重生境利用特征，可能连接林冠与地面传播循环。然而在巴西南部特别是圣保罗州碎片化景观中食蚁兽作为T. cruzi宿主的角色仍缺乏充足分子证据。为此，研究人员开展本项研究，旨在调查圣保罗州食蚁兽中T. cruzi的感染率与分子特征，为其参与野生传播网络提供分子证据并补充发生记录。

主要关键技术方法

研究人员回顾性分析2012–2025年来自圣保罗州18个市镇、经兽医机构接收的大食蚁兽与二趾食蚁兽共26只个体的EDTA抗凝血样本。提取基因组DNA后以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)基因PCR验证DNA质量。采用锥虫科(Trypanosomatidae)通用引物TRY816/SSU450进行18S rRNA基因常规及巢式PCR(nested PCR)，并以T. cruzi特异kDNA引物(121/122)提高诊断特异性。阳性扩增产物双向Sanger测序，BLASTn比对GenBank参考序列，用ClustalW与MUSCLE进行序列比对，BEAST 2开展贝叶斯系统发育推断(Bayesian inference)，以Trypanosoma vivax(MH184518.1)为外群(outgroup)，用Fisher精确检验评估感染状态与宿主种类、性别、年龄阶段及采样季节的关联。

研究结果

3. Results（结果）

所有26份样本GAPDH内参PCR均为阳性，表明DNA质量合格。T. cruzi 18S rRNA基因检出率为42.3%（11/26），其中大食蚁兽7例（63.6%）、二趾食蚁兽4例（36.4%）。Fisher检验显示感染状态与宿主种类(p=0.348)、性别(p=1.000)、年龄阶段(p=0.674)、采样季节(p=0.275)均无统计学显著关联。阳性个体分布于圣保罗州多个市镇，空间上集中于中西部，Botucatu市阳性数最多(n=3)，其余分布于Len?óis Paulista、Piratininga、Areiópolis、Avaré、Cap?o Bonito、Jaú、Promiss?o及Cerqueira César。结论：T. cruzi在食蚁兽中感染率较高且在人为影响景观中广泛分布，所评估宿主与时空变量并非感染的决定性因素。

BLASTn分析显示所获18S rRNA序列与GenBank中T. cruzi参考株相似度93.66%–99.65%；大食蚁兽来源7条序列相似度93.66%–99.31%，其中6条与分离株C00964完全一致；二趾食蚁兽来源4条序列相似度97.18%–99.65%。所有新序列已存入GenBank（登录号PZ062943–PZ062953）。

贝叶斯系统发育树以T. vivax为外群，11条食蚁兽来源序列（红色标注）与已知T. cruzi参考序列聚于同一获高支持（后验概率posterior probability≥0.95）的分支内，种内遗传分化低，未见按宿主或地理来源明显聚类。结论：分子鉴定确证检出病原为T. cruzi，18S rRNA标记适用于种级鉴定但分辨率不足以区分T. cruzi离散分型单位(discrete typing unit, DTU; TcI–TcVI)。

讨论与结论翻译（总结讨论部分要点并翻译研究结论）

研究人员指出，食蚁兽中较高T. cruzi检出率支持其在圣保罗州受人为干扰景观中参与并维持野生传播网络。阳性个案空间聚集于中西部且跨年份出现，与当地锥蝽及其他野生宿主阳性记录吻合，说明寄生虫在碎片化景观中持续循环。食蚁兽尤其二趾食蚁兽利用树巢与生土穴的行为可能桥接林冠与地面传播循环，而非通过捕食锥蝽经口感染（食蚁兽主食蚁/白蚁）。未检测到感染与年龄相关可能与幼体长期依附母体共享暴露微生境有关；未检出季节性与采样不均及机会性设计有关。18S rRNA虽保守但足以确认T. cruzi种级归属，DTU分型需额外多态性标记。

研究结论翻译：本研究提供了巴西东南部食蚁兽感染Trypanosoma cruzi的分子证据，强化了食蚁兽作为野生传播网络中相关宿主的作用。结果强调野生动物在维持寄生虫循环中的重要性，并指出需采用整合分子、生态与流行病学数据的方法来更好理解宿主—寄生虫动态及潜在传播界面。所检出的T. cruzi在多年份多市镇的持续存在，支持该寄生虫在圣保罗州食蚁兽种群中的广泛流行与持久循环。