《Journal of Cystic Fibrosis》：Vanzacaftor-Tezacaftor as an alternative therapeutic resource for the ETI-Resistant L467F-F508del Allele: Ex vivo prediction and exploratory clinical assessment
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瓦莱里娅·卡普罗（Valeria Capurro）|埃马努埃拉·佩斯切（Emanuela Pesce）|费德里科·克雷斯塔（Federico Cresta）|克里斯蒂娜·帕斯托里诺（Cristina Pastorino）|爱丽丝·曼特罗（Alice Mantero）|瓦莱里娅·托
瓦莱里娅·卡普罗（Valeria Capurro）|埃马努埃拉·佩斯切（Emanuela Pesce）|费德里科·克雷斯塔（Federico Cresta）|克里斯蒂娜·帕斯托里诺（Cristina Pastorino）|爱丽丝·曼特罗（Alice Mantero）|瓦莱里娅·托马蒂（Valeria Tomati）|瓦莱里娅·达科（Valeria Daccò）|劳拉·克劳特（Laura Claut）|贝内德塔·法布里齐（Benedetta Fabrizzi）|费德里科·扎拉（Federico Zara）|卡洛·卡斯特拉尼（Carlo Castellani）|尼科莱塔·佩德蒙泰（Nicoletta Pedemonte）
意大利热那亚IRCCS詹尼娜·加斯利尼研究所（IRCCS Istituto Giannina Gaslini）医学遗传学部门（UOC Genetica Medica）
摘要
背景
Elexacaftor/Tezacaftor/Ivacaftor（ETI）的三联组合彻底改变了囊性纤维化（CF）的治疗方式；然而，仍有一部分具有合适基因型的患者对这种治疗没有反应。我们之前发现L467F-F508del复合等位基因是导致治疗失败的原因，这种等位基因会导致CFTR蛋白的严重加工缺陷，使其对ETI治疗产生抗性。
方法
为了解决这一未满足的需求，我们评估了新一代组合药物Vanzacaftor/Tezacaftor（Vnz/Tez）的疗效。我们使用了来自六名携带L467F-F508del复合等位基因及轻微功能突变患者的原代人鼻上皮（HNE）细胞，并通过同情使用（compassionate use）监测了一名接受Vanzacaftor/Tezacaftor/Deutivacaftor（VTD）治疗患者的临床反应。在CFBE41o-细胞中进行了机制验证。
结果
在患者来源的HNE模型中，Vnz/Tez治疗显著恢复了CFTR的活性，克服了ETI治疗之前观察到的阻断现象。值得注意的是，我们报告了一名接受VTD治疗的患者，其肺功能（FEV1）部分改善（增加了220毫升），运动耐受性提高，汗液中的氯化物浓度从100毫米摩尔/升降至87毫米摩尔/升。在异源表达系统中，Vnz/Tez能够成功修复L467F-F508del突变体，促进其形成成熟的、经过复杂糖基化的CFTR形式。
结论
我们的研究结果表明，Vanzacaftor/Tez组合具有更强的矫正能力，能够修复L467F-F508del复合等位基因引起的严重加工缺陷。这项研究为目前标准治疗方法无法治疗的患者提供了一种有前景的治疗方案，并强调了将体外筛选与临床监测相结合在精准医疗策略中的重要性。
引言
高效调节剂疗法，特别是Elexacaftor、Tezacaftor和Ivacaftor（ETI）的组合，重新定义了囊性纤维化（CF）的临床治疗格局[1]。虽然ETI能有效修复F508del-CFTR蛋白的折叠和门控缺陷，但患者反应仍存在显著异质性。一个特别的挑战是存在两个或多个顺式变异的复合等位基因，这些变异会改变蛋白质的折叠动态，使其对标准矫正剂产生抗性[2,3]。
我们之前在两名对ETI治疗无反应的F508del杂合患者中发现了这种现象[4]。我们确定F508del等位基因上的L467F替代导致非常严重的加工缺陷。这种“超缺陷”突变蛋白几乎完全缺乏成熟糖基化，Elexacaftor和Tezacaftor无法克服这一缺陷[4]。这些发现证实了L467F-F508del是一种对ETI治疗有抗性的复合等位基因，需要寻找更有效的矫正策略。
最近开发的Vanzacaftor、Tezacaftor和Deutivacaftor三联组合代表了下一代CFTR调节剂[[5], [6], [7]]。虽然Deutivacaftor提高了药代动力学稳定性，允许每日一次给药[8]，但该组合的增强疗效主要归功于Vanzacaftor。Vanzacaftor是一种新型矫正剂，与Tezacaftor联合使用时，在临床前模型中显示出比ETI更好的CFTR氯离子转运和蛋白质加工效果[7]。值得注意的是，最近的三期数据显示，基于Vanzacaftor的方案能够纠正31种之前对Elexacaftor无反应的变异基因型[6]，验证了其治疗难治性基因型的潜力。
在这项研究中，我们假设Vanzacaftor和Tezacaftor的增强矫正能力可以克服L467F-F508del等位基因引起的加工障碍。通过使用异源表达系统和患者来源的鼻上皮模型，我们发现Vanzacaftor-Tezacaftor组合成功恢复了这种先前无法矫正的变异体的蛋白质成熟和运输功能。
章节摘录
研究对象
研究对象为六名同时携带F508del等位基因和轻微功能CFTR变异、且对ETI治疗无反应的患者：供体ID分别为TT001（L467F-F508del/G542X）、TT190（L467F-F508del/E585X）、MI377（L467F-F508del/N1303K）、MI450（L467F-F508del/621+1G>T）、GE490（L467F-F508del/W1282X）和GE493（L467F-F508del/3878delG）。供体ID TT001和TT190在之前的研究中已被报道携带L467F-F508del复合等位基因[4]。
已获得患者的书面知情同意
Vanzacaftor/Tezacaftor部分恢复了携带L467F-F508del复合等位基因的患者来源鼻上皮中的CFTR活性
为了评估新型Vanzacaftor/Tezacaftor（Vnz/Tez）矫正组合的临床潜力，我们在原代人鼻上皮（HNE）细胞上进行了体外功能研究。我们招募了五名携带L467F-F508del复合等位基因且具有轻微功能缺陷（基因型：L467F-F508del/MF）的患者，其中包括之前研究中提到的两名患者[4]。对L467F-F508del复合等位基因的先前研究表明，这种等位基因会导致严重的
讨论
高效调节剂疗法的引入，特别是ETI三联组合，从根本上改变了大多数囊性纤维化患者的临床治疗过程[1]。然而，仍有一部分患者尽管具有合适的基因型，但未能从中获益[1]。我们的研究确定了L467F-F508del复合等位基因是这种治疗失败的一个分子学原因，并证明了下一代
资金支持
本研究得到了Fondazione Fibrosi Cistica Ricerca的资助（项目编号FFC #10/2021，Genova、Campiglione Fenile和Napoli分部以及Gruppo FC Altomilanese的贡献），以及Effetto Kaftrio – 子研究1（Ospedaletti、Genova、Brindisi Torre、Milano、Napoli、Cosenza Sud、Valpolicella和Roma Pomezia分部的贡献）。NP实验室的工作还得到了意大利卫生部的支持，通过Cinque per mille（5Xmille 2019项目）资助
致谢
我们衷心感谢囊性纤维化患者参与本研究并持续支持我们的工作。
