靶向反义寡核苷酸疗法可恢复由剪接突变引起的色素性视网膜炎中的PRPF31蛋白表达

《Molecular Therapy》：Targeted antisense oligonucleotide therapy rescues PRPF31 expression in retinitis pigmentosa caused by a splicing mutation

　　

Poulami Banik | Felix Zimmann | Prasoon K. Thakur | Lubica Dudakova | Kate?ina Ve?erková | Ondrej Kostov | Marvin H. Caruthers | Michal Kolá? | Inka Krej?í?ová | Marie Vajter | Petra Liskova | Tomá? Bárta | David Staněk

捷克科学院分子遗传学研究所，布拉格，CZ 142 00，捷克共和国

摘要

剪接因子中的致病性变异是常染色体显性视网膜色素变性（RP）的第二大常见原因，其中PRPF31基因的突变最为普遍。本研究发现了一种新的PRPF31基因内含子变异（c.1074-11C>G），该变异会生成一个隐性的3′剪接位点，导致转录本异常剪接，进而产生具有改变的C末端的蛋白质。然而，这种致病性蛋白质不稳定，在患者来源的诱导多能干细胞（iPSCs）中无法检测到。此外，在患者来源的视网膜色素上皮（RPE）中，全长PRPF31蛋白的表达也降低了。为纠正这种剪接缺陷，我们设计了一组针对外显子10和内含子10中潜在RNA结合位点的反义寡核苷酸（ASOs），并找到了一种能够在微型基因报告系统以及患者来源的iPSCs和RPE中纠正PRPF31剪接的候选ASO。进一步实验表明，ASO处理能够提高携带该内含子突变的患者来源iPSCs和RPE中的PRPF31蛋白表达，这证明了基于ASO的方法有望恢复具有相同或类似剪接缺陷患者的PRPF31蛋白表达。