《Molecular Therapy》：Directing fratricide within T cell products using an anti-uPAR chimeric antigen receptor to drive the production of potent therapeutic cells
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劳伦·萨科（Lauren Sarko）|大卫·吉万德（David Givand）|布伦丹·拉廷（Brendan Rattin）|克莱尔·谢普利（Claire Shepley）|安娜·托马西（Anna Tommasi）|艾伦·阿塔尔（Allen Attar）|雷切尔·泰勒（Rach
劳伦·萨科（Lauren Sarko）|大卫·吉万德（David Givand）|布伦丹·拉廷（Brendan Rattin）|克莱尔·谢普利（Claire Shepley）|安娜·托马西（Anna Tommasi）|艾伦·阿塔尔（Allen Attar）|雷切尔·泰勒（Rachel Taylor）|本杰明·库特勒（Benjamin Kutler）|罗希尼·M·特雷诺尔（Roshini M. Traynor）|阿尼卡·乌帕德亚亚（Anika Upadhyaya）|麦肯齐·姆努克（Mackenzie Mnuk）|卡文·格赫克（Cavin Gehrke）|内森·穆伦（Nathan Murren）|泰勒·K·乌兰德（Tyler K. Ulland）|克里斯蒂安·卡皮蒂尼（Christian Capitini）|特蕾莎·科坦切克（Theresa Kotanchek）|克里沙努·萨哈（Krishanu Saha）
摘要
原代T细胞的细胞疗法生产过程中，最终产品中的细胞群体往往具有异质性，许多细胞缺乏所需的受体表达，或者处于耗竭状态并表现出其他功能障碍。在这里，我们设计了一种新的细胞内在策略，通过基因改造使原代人类T细胞能够自主检测并清除功能异常的细胞。这种集成的检测和清除过程被称为“定向自毁”（directed fratricide），通过非病毒CRISPR基因编辑技术实现：首先敲除T细胞受体（TCR）α链（TRAC基因），然后整合一种针对尿激酶型纤溶酶原激活剂受体（uPAR，也称为CD87）的嵌合抗原受体（CAR）。在生产过程中，强烈的T细胞刺激或激活会促使一小部分细胞表达uPAR，从而触发CAR介导的细胞杀伤作用。这种“定向自毁”机制能够促进目标细胞的增殖并摧毁非目标细胞，该过程可以通过计算模型进行模拟，并通过添加特定培养基成分来有效控制。该策略使得抗uPAR和抗GD2 CAR T细胞产品的纯度可达到≥99%（CAR+/TCR-），从而形成类似记忆细胞的表型。了解T细胞亚群之间的生长动态并通过CRISPR技术对其进行重编程，可以加速高效细胞产品的生物制造过程，而无需采用复杂的筛选方法。
