另一个直接使用等离子体法进行褪黑激素酶联免疫吸附试验（ELISA）并产生可疑结果的例子

《International Journal of Surgery》：Another example of a direct plasma melatonin ELISA producing questionable results

本期刊最近发表的一篇论文^[1]在褪黑素的分析以及从研究结果中得出的结论方面存在一些严重缺陷。

该研究的主要目的是探讨经皮耳迷走神经刺激（taVNS）对伴有睡眠障碍的功能性消化不良患者的消化不良症状和睡眠质量的影响。次要研究目的之一是探讨褪黑素可能发挥的作用。作者在受试者空腹状态下采集了静脉血样本，分别在干预前和干预后4周的08:00至10:00之间进行采样。研究发现，taVNS显著提高了血清褪黑素水平，从基线的195 pg/ml升高到4周治疗结束时的253 pg/ml，而taVNS组的褪黑素水平明显高于tnVNS组（209 pg/ml vs 191 pg/ml）。

普遍认为，单次测量褪黑素水平（尤其是在早晨）是不可靠的^[2–4]。褪黑素的分泌在03:00至06:00之间停止^[5]，其血浆水平会以个体差异决定的半衰期速率下降。由于实际采样时间跨度超过两个半衰期，因此任何关于褪黑素分泌昼夜节律或峰值水平的推断都是不可靠的。即使采样时间标准化为每天上午8点，也无法提供有意义的信息。受试者的昼夜节律时间各不相同（有些人较早，有些人较晚），褪黑素的最大分泌速率、前一晚的光照强度以及褪黑素代谢的半衰期也各不相同。这些结果并不能反映目标人群中褪黑素的稳态特征。尽管作者可以利用这种实验设计引用其他已发表的论文，但这并不能使他们的结论更加可靠。

再来看这篇论文中报告的褪黑素实际浓度，还存在其他问题。早晨采样的褪黑素水平至少比预期高出20倍。大量证据表明，使用经过适当验证的RIA、ELISA或HPLC-MS/MS方法测量08:00至10:00期间的血浆褪黑素水平时，其浓度应低于10 pg/ml^[4]。事实上，对全球范围内使用多种方法测量的179篇论文的研究进行评估后发现，30岁以后人群的平均褪黑素水平低于100 pg/ml^[6]。根据34组数据，唾液中的褪黑素峰值水平约为24 pg/ml^[7]。

体外测定血清、血浆和其他生物液体中的人类褪黑素浓度”。试剂盒制造商没有提供任何证据表明该试剂盒仅检测褪黑素，也未详细说明实际测试了哪些潜在的交叉反应化合物。该检测完全依赖于所用抗体的特异性，因为没有提取/纯化步骤。该公司未在试剂盒使用说明中报告对基质效应的检测情况，而这是直接检测方法中的一个重要问题。同样，作者可以找到使用该ELISA试剂盒的论文，但这些论文通常会报告在松果体不分泌褪黑素的时段出现极高的褪黑素水平。胃肠道不会影响血浆中的褪黑素水平^[8]。有一篇关于小鼠的论文使用Elabscience ELISA试剂盒后，报告C57Bl/6品系小鼠（这种小鼠基因上无法合成褪黑素）的褪黑素水平高达370 pg/ml^[9]。最近一篇在人类身上使用Elabscience ELISA的论文在发表后删除了所有褪黑素数据，因为“该褪黑素检测方法可能无效，因此摘要和结果部分显示的所有褪黑素数据都应被忽略”^[10]。

不幸的是，像Elabsciences这样的公司销售的一些直接血清褪黑素ELISA试剂盒会得出严重异常高的褪黑素结果。许多审稿人在审稿过程中缺乏评估试剂盒准确性的专业知识，期刊也不愿意撤回或更正已发表的论文，但这种情况确实存在。以下论文因褪黑素检测问题已被撤回：^[11–14]

在科学领域，我们追求准确性。如果我们声称检测到了褪黑素水平的差异，那么我们必须确信这些数值是准确的。我无法想象会有已发表的论文报告胰岛素或肌钙蛋白水平是预期浓度的10倍或100倍。仅仅因为作者能找到其他也在09:00报告极高褪黑素水平的论文，并不能证明这些结果就是正确的。

作者得出结论，taVNS（而非tnVNS）提高了血清褪黑素水平，并且taVNS增强了迷走神经活性，空腹状态下的HF与血清褪黑素水平呈正相关。但我们无法确信他们的治疗确实影响了褪黑素水平。事实上，我们也不能确信他们使用的检测方法确实只检测到了褪黑素，而没有检测到其他物质，或者该检测方法没有受到基质效应的影响。

伦理批准

不适用。

知情同意

不适用。