用于癌症免疫治疗的双特异性抗（PD-1/CTLA-4）单链二聚体的体外特性研究

《Scientific Reports》：In vitro characterization of a bispecific anti-(PD-1/CTLA-4) single-chain diabody for cancer immunotherapy

　　

摘要

在临床实践中，结合使用抗CTLA-4和抗PD-1抗体的免疫疗法对多种癌症的治疗显示出良好的效果。在本研究中，我们开发了一种新型的双特异性二抗体，用于同时靶向PD-1和CTLA-4以诱导抗肿瘤免疫。这种双特异性单链二抗体是根据抗PD-1和抗CTLA-4抗体的可变区氨基酸序列设计的。在细菌系统中表达并通过亲和纯化后，我们通过流式细胞术评估了该二抗体单独存在或在与PD-1和CTLA-4配体共同存在时的结合特性。全长His标签蛋白的预期分子量为约55 kDa，这一点通过SDS-PAGE分析和Western blotting分析得到了验证。该双特异性二抗体能够选择性地结合表达PD-1和CTLA-4的细胞，并抑制PD-1/PD-L1以及CD86/CTLA-4之间的相互作用。在T细胞活化实验中，这种新型蛋白显著增加了IL-2和IFN-γ的分泌（且这种效应具有剂量依赖性）。此外，它还逆转了PD-L1对ConA刺激的PBMCs的抑制作用。在MLR（混合淋巴细胞反应）实验中，该二抗体也显著促进了T细胞的增殖和细胞因子的释放。尽管仍需进行更多的体外和体内生物学功能评估，但这种双特异性二抗体可以被视为一种有前景的检查点抑制剂候选分子。