通过多色定量流式细胞术检测方法测定的正常B细胞和B细胞恶性肿瘤中的抗原水平

《Blood Immunology & Cellular Therapy》：Antigen levels in normal B cells and B cell malignancies established by a multicolor quantitative flow cytometry assay

　　

Jay Y. Spiegel | Sheren Younes | Gary Gitana | Scott Bornheimer | Majid Mehrpouyan | Nofar Marom | Yaso Natkunam | Saurabh Dahiya | David B. Miklos | Jean Oak

迈阿密佛罗里达州西尔维斯特综合癌症中心

摘要

B细胞上的抗原密度可能会影响靶向治疗的效果，然而目前的诊断工具（如免疫组化[IHC]）在定量方面存在局限性。我们开发了一种标准化的定量流式细胞术方法，用于检测CD19、CD20和CD22的表达，并确定了非恶性和恶性B细胞群体中的参考范围。我们设计了一种10色流式细胞仪试剂盒，使用饱和浓度的抗体和校准过的荧光染料结合定量珠子来计算每个细胞中的抗原分子数量。仪器校准、抗体滴定和抗原稳定性均按照临床实验室指南进行了验证。在非恶性B细胞淋巴瘤患者的外周血（PB）、骨髓（BM）和淋巴结（LN）样本中评估了抗原密度。结果显示，CD19、CD20和CD22在B细胞中的表达水平最高，而在骨髓和淋巴结中显著较低。在B细胞淋巴瘤中，抗原密度相对于非恶性对照组有所降低，尤其是在滤泡性淋巴瘤和套细胞淋巴瘤中CD19的表达尤为明显。在弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中，近期（6个月内）接受过利妥昔单抗治疗的患者表现出CD20表达显著下调，同时CD19和CD22的表达也有所降低。定量流式细胞术比免疫组化具有更高的灵敏度，能够检测到标准免疫组化和流式细胞术方法无法识别的混合异常细胞群体及抗原下调现象。这种定量流式细胞术方法能够全面评估不同疾病状态和治疗过程中的B细胞抗原密度，为治疗选择和潜在反应预测提供关键数据，同时也有助于免疫治疗生物标志物的开发。