ALKBH5通过m6A RNA甲基化调控FOXA1的表达，从而促进顺铂耐药口腔鳞状细胞癌的进展

《DARU Journal of Pharmaceutical Sciences》：ALKBH5 promotes the progression of cisplatin-resistant oral squamous cell carcinoma by regulating FOXA1 expression via m6A RNA methylation

摘要

背景

口腔鳞状细胞癌（OSCC）占口腔癌病例的绝大多数。越来越多的证据表明，AlkB同源物5（ALKBH5）和叉头框蛋白A1（FOXA1）都与OSCC中对顺铂的耐药性的产生有关。本研究旨在明确它们的功能作用，并阐明其背后的分子机制。

方法

通过qPCR和Western blot检测ALKBH5、FOXA1和YTHDF2的表达。通过逐步增加剂量建立了顺铂耐药细胞系（H357 CisR和SCC4 CisR）。为了研究关键的功能表型，采用了一系列检测方法：CCK-8检测细胞活力，通过菌落形成检测增殖能力，以及通过Transwell检测迁移和侵袭能力。生物信息学分析（SRAMP、RM2Target）预测了FOXA1上的m6A位点及其与ALKBH5的结合情况，并通过MeRIP-qPCR和RIP进行了验证。通过放线菌素D实验测量了FOXA1 mRNA的稳定性。

结果

在顺铂耐药的OSCC中，ALKBH5和FOXA1的表达上调，其中FOXA1对于维持肿瘤发生表型至关重要。生物信息学和生化分析证实FOXA1是ALKBH5的直接靶标。ALKBH5通过去甲基化FOXA1 mRNA来稳定其转录本，并通过抑制YTHDF2介导的降解来增强其表达。功能上，ALKBH5的过表达逆转了FOXA1敲低所引起的肿瘤抑制效应。

结论

我们的研究表明，ALKB5通过依赖m6A的FOXA1转录本去甲基化作用促进OSCC对顺铂的耐药性，这突显了ALKBH5-FOXA1轴作为克服这种耐药性的有前景的治疗靶点。

背景

口腔鳞状细胞癌（OSCC）占口腔癌病例的绝大多数。越来越多的证据表明，AlkB同源物5（ALKBH5）和叉头框蛋白A1（FOXA1）都与OSCC中对顺铂的耐药性的产生有关。本研究旨在明确它们的功能作用，并阐明其背后的分子机制。

方法

通过qPCR和Western blot检测ALKBH5、FOXA1和YTHDF2的表达。通过逐步增加剂量建立了顺铂耐药细胞系（H357 CisR和SCC4 CisR）。为了研究关键的功能表型，采用了一系列检测方法：CCK-8检测细胞活力，通过菌落形成检测增殖能力，以及通过Transwell检测迁移和侵袭能力。生物信息学分析（SRAMP、RM2Target）预测了FOXA1上的m6A位点及其与ALKBH5的结合情况，并通过MeRIP-qPCR和RIP进行了验证。通过放线菌素D实验测量了FOXA1 mRNA的稳定性。

结果

在顺铂耐药的OSCC中，ALKBH5和FOXA1的表达上调，其中FOXA1对于维持肿瘤发生表型至关重要。生物信息学和生化分析证实FOXA1是ALKBH5的直接靶标。ALKB5通过去甲基化FOXA1 mRNA来稳定其转录本，并通过抑制YTHDF2介导的降解来增强其表达。功能上，ALKB5的过表达逆转了FOXA1敲低所引起的肿瘤抑制效应。

结论

我们的研究表明，ALKB5通过依赖m6A的FOXA1转录本去甲基化作用促进OSCC对顺铂的耐药性，这突显了ALKBH5-FOXA1轴作为克服这种耐药性的有前景的治疗靶点。