科研进阶：高通量蛋白定量，首选 In-Cell Western

蛋白检测与定量是生命科学研究的核心技术手段。当我们面对大量快速筛选、表型分析、信号通路解析等实验时，传统Western Blot技术耗时久、人力投入大的短板日益凸显。实现蛋白检测流程的高通量、自动化与精准定量升级，已然成为科研领域亟待解决的研究痛点。

In-Cell Western技术为您助力~~

什么是In-Cell Western？

In-Cell Western™是在96孔板或384孔板培养的细胞上，利用目标蛋白的特异性抗体及近红外荧光染料标记的二抗，对目标蛋白进行荧光定量分析的技术。

LICORbio公司推出的 ODYSSEY® In-Cell Western（ICW） Assay 技术，以其简便、高通量、可重复性强和真正定量的优势，成为蛋白检测新趋势的代表，尤其适用于高通量筛选和表型分析。

In-Cell Western的实验流程

① 以一定密度在96/384孔板上培养细胞；

② 生长到合适密度后，加药物或其他处理；

③ 加入多聚甲醛进行固定；

④ 加入Triton X-100对细胞进行透化处理；

⑤ 封闭30min；

⑥ 加入一抗孵育；

⑦ 加入荧光二抗孵育1h，洗涤，Odyssey成像检测。

In-Cell Western的实验优势

 时间短：无需抽提蛋白，电泳，转膜

 通量高：使用96/384孔板，实现多样本检测

 高重复性和高准确性

用传统的Western Blot方法，在两张膜上分别检测GAPDH和PMLC20这两种蛋白，每张膜各进行13次重复，CV值为 0.27；用In-Cell Western™法进行30次重复，CV值为0.08-0.16。

 应用广泛

包括药物筛选、细胞信号通路研究、病毒感染研究、疾病研究、药物治疗效果评估以及基础细胞生物学研究等诸多领域。更重要的是，它还是美国药典官方推荐的胰岛素检测技术。

案例一：In-Cell Western™助力PROTAC筛选

不同浓度化合物（浓度从高到低）处理对蛋白PARP1的影响

Lua, L. D., & Salvino, J. M. (2023). The In-Cell Western immunofluorescence assay to monitor PROTAC mediated protein degradation. Methods in Enzymology, 681, 115–153.

案例二：胰岛素筛选

美国胰岛素药典官方推荐的检测方法---Odyssey In-Cell Western™技术，因其灵敏度更高，结果更精确，通量更高，重复性更好。

案例三：磷酸化分析

Selkirk et al. J. Biomol. Screen. 11:351-8 (2006)

In-Cell Western的推荐产品

1 LI-COR近红外荧光二抗，亮度高，稳定性好，现货供应

2 均一化方案：CellTag™ Stain替代内参

提供CellTag 700 Stain（926-41090）和CellTag 520 Stain（926-41094）作为ICW Assay均一化的解决方案。CellTag染色剂在透化细胞的细胞核和细胞质中积累，并在各种细胞类型和细胞数量中提供线性荧光信号。

将不同数量的A431和NIH/3T3细胞接种在96孔板中。细胞被固定、透化、用CellTag 700 Stain (0.2 μM)染色，并用Odyssey Classic红外成像系统检测。

3 Intercept 非哺乳动物蛋白封闭液，背景更低

即用型，可用于化学发光实验和近红外荧光Western实验。

4 黑色底透细胞培养成像板

 贴壁细胞：透明黑板，平底

 悬浮细胞：透明黑板，圆底

In-Cell Western服务

基因有限公司率先推出近红外荧光定量Western Blot和In-Cell Western服务，专业团队为您提供符合期刊杂志发表要求的、高质量的、可重复的定量Western Blot数据，加速研究成果发现与发表。

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