利用新制备的针对沙门氏菌鞭毛蛋白的单克隆抗体建立阻断ELISA方法，用于检测感染鸡只体内的抗体

《BMC Veterinary Research》：Establishment of a blocking ELISA using a newly generated monoclonal antibody against Salmonella flagellin for detecting antibodies in infected chickens

摘要

背景

沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原体，广泛存在于畜禽生产的各个环节。沙门氏菌污染不仅会影响畜牧业的健康发展，还会通过肉类和蛋类产品的生产、加工及食用途径感染人类，对公共健康构成严重威胁。因此，建立能够同时识别不同沙门氏菌血清型的检测方法至关重要。

结果

本研究以沙门氏菌鞭毛蛋白作为免疫原，筛选并制备单克隆抗体，最终建立了阻断ELISA方法。研究中通过酸解法提取肠炎沙门氏菌的鞭毛蛋白，用于免疫BALB/c小鼠。经过三次免疫后进行细胞融合，获得了6个能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。1F6单克隆抗体与沙门氏菌鞭毛蛋白具有极高的反应性，亲和力可达1.11×10¹⁰ M^?1。特异性分析表明，1F6抗体可与所有具有鞭毛的沙门氏菌种类发生反应，但不与无鞭毛的鸡沙门氏菌或其他细菌种类反应，这证明了该抗体具有很强的特异性，适用于该方法。随后通过阵列滴定法确定了bELISA中抗原的最佳包被浓度为1 μg/ml，而酶标记抗体的最佳浓度为534 ng/ml。通过多种实验优化确定了最佳的检测条件。测试结果显示，该方法能够特异性识别沙门氏菌，且在与11种不同致病微生物感染的鸡血清检测时无交叉反应。此外，该方法应用于227份鸡血清样本时，符合率为97.35%。另外还对某养殖场205份蛋鸡血清样本进行了检测，在第90天时有4%的样本检测出沙门氏菌，这一比例与以往研究一致，说明该方法可用于生产企业中的沙门氏菌监测。

结论

该阻断ELISA方法是利用沙门氏菌鞭毛蛋白作为抗原开发而来的，具有出色的稳定性、强特异性和高灵敏度，非常适合用于感染鸡只中沙门氏菌的广谱筛查。